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EDTA-胰蛋白酶的配制（实验简介,实验需要的试剂,实验步骤,注意事项）
Release Time：2020-07-30一、EDTA-胰蛋白酶的配制实验简介：
二、EDTA-胰蛋白酶的配制实验所需材料及试剂：
三、EDTA-胰蛋白酶的配制实验步骤：
1.磷酸酶的质量/体积比为0.25％，即将0.25g磷酸酶注入100毫升PBS中。注意，尽量不要用水溶解，因为必须保持渗透压。
2. EDTA工作溶液的溶解度为0.02％-0.1％，可根据细胞消化的难度进行调整。不需要EDTA，可以省略易于消化的细胞。 EDTA对细胞粘附有影响，因此应大量使用。如果影响粘附，则必须将其用于消化，在用完全培养基终止消化后，离心并弃去上清液，然后添加完全培养基以进行培养以除去EDTA。如果不影响附着力，则不要离心。
3. EDTA的浓度也是质量体积比。用磷酸酶稀释PBS。
4.请注意，血清可以阻止血浆酶的作用，但不能阻止EDTA。对于某些细胞，有必要在消化后停止离心。
5.当pH约为8时，磷酸酶和EDTA最易溶解。在制备过程中，您可以先滴几滴氢氧化钠以将pH调整为8。请注意，磷酸酶会使溶液变酸，因此您应随时溶解时测量pH值。调整。请注意，不应添加过量的氢氧化钠，否则电池将无法承受碱的作用。
6.磷酸酶EDTA相对不溶。可以用磁力搅拌器搅拌，或将其置于4度的冰箱中，溶解后过滤并灭菌。
7.可配备2-3倍血浆酶，节省时间和过滤器。使用时，请对PBS消毒。
8.将储存溶液储存在-20°C的冰箱中，然后将溶液储存在4°C。使用时，请勿将其放在27°C的水浴中，因为这会使自由基酶迅速无法使用。使用前放置一次。是的，因为添加的数量很少，因此通常不会冻结细胞。
9.在消化过程中，向培养瓶中加入适量的胰酶。个人经验，一般在10cm培养皿中加0.5ml。加入后，立即摇动培养皿盖住胰酶。一旦充满，用负压吸引多余的胰酶排出，将其加入37度培养箱中进行消化。
10.请注意，过量的胰酶对细胞有害，而过量的EDTA也会影响粘附，因此无需将细胞浸入血浆酶中进行消化。
11.磷酸酶37具有最佳的消化作用，并具有在37度以下消化的能力。在消化过程中，甚至不需要将一些易于消化的细胞放入培养箱中。请注意，它不能消化太长时间。
四、实验所需试剂清单：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 1000ul蓝吸头 | FT-1000 | ||
| 2 | 氢氧化钠 | JT8650 | 1310-73-2 | |
| 3 | PBS | HC1488 | ||
| 4 | EDTA | JH0691 | 600-00-4 | |
| 5 | 螯合树脂 chelex 100 | SS6072 |
