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农杆菌感受态细胞的制备和转化（农杆菌感受态细胞,实验简介,实验步骤,实验所需试剂）
Release Time：2020-07-30一、农杆菌感受态细胞的制备和转化实验简介：
二、农杆菌感受态细胞的制备和转化实验所需材料及试剂：
三、农杆菌感受态细胞的制备和转化实验步骤：
⑴ 农杆菌感受态细胞的制备
1. 将储存在-70°C的EHA105在含有50微克/ 毫升链霉素的平板上划线，并在28°C下培养。
2. 挑选一个菌落，并在5毫升 YM液体培养基中培养，在28°C下以220rpm的转速振摇12-16小时。
3. 取2毫升细菌溶液并将其转移至100毫升 YM液体培养基中，并在28°C和220rpm摇动下培养直至OD600 = 0.5。
4. 转移到无菌离心管中，以5000 rpm离心5分钟，然后除去上清液。
5. 加入10毫升预冷的0.1M CaCl2溶液，轻轻悬浮细胞并置于冰上20分钟。在4°C下以5000 rpm的转速离心5分钟，然后除去上清液。
6. 加入4毫升含15％甘油的0.1M CaCl2预冷溶液，轻轻悬浮。
7. 将农杆菌悬浮液分成无菌的Ep管，并且将每管200μl冷冻在-70℃。
⑵ 农杆菌EHA105的二元载体转化
- 取约1微克质粒DNA并将其添加到200毫升 EHA105感受态细胞中，混匀。
- 将其在冰浴中放置30分钟，然后在-70°C放置10分钟。
- 在37℃水浴中5分钟或42℃水浴1分钟，然后冰浴2分钟。
- 在28℃下添加800毫升 YM液体培养基，以175rpm摇动培养3小时，然后将其铺在含50微克/ 毫升卡那霉素的YM板上。
- 在28°C下培养直至形成单个菌落。
四、农杆菌感受态细胞的制备和转化实验所需试剂清单：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 10ul白吸头(灭菌) | FT-10-H | ||
| 2 | 1000ul蓝吸头 | FT-1000 | ||
| 3 | 200ul黄吸头 | FT-200 | ||
| 4 | 2毫升圆底连盖离心 | F-EP020 | ||
| 5 | CaCl2 | JT0418 | 10043-52-4 | |
| 6 | 甘油 | JT26018 | 56-81-5 |
