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双缩脲法测定蛋白质含量 （实验原理,实验所需试剂,实验步骤）
Release Time：2020-07-30一、双缩脲法实验原理
紫色复合色的强度与蛋白质浓度成正比，与蛋白质分子量和氨基酸组成无关。它可以用来确定蛋白质含量。测量范围是1-10 mg蛋白质。干扰测定的主要物质是：硫酸铵，Tris缓冲液和某些氨基酸。
这种方法的优点是速度快，不同的蛋白质产生相似的颜色，干扰物质少。主要缺点是灵敏度差。因此，缩二脲法通常不用于蛋白质的精确测定。
二，双缩脲法所需材料
1种试剂：
标准蛋白溶液的制备：用标准结晶牛血清白蛋白（bsa）或标准酪蛋白制备10mg / ml标准蛋白溶液。可以用0.66 a280校准纯度，bsa浓度为1mg / ml。如有必要，可以使用标准蛋白质预先通过微凯氏定氮法测定蛋白质氮含量，计算其纯度，然后称重，并根据其纯度制备标准蛋白质溶液。用H2O或0.9％NaCl制备牛血清白蛋白，用0.05 NaOH制备酪蛋白。
双缩脲试剂制备：称取1.50g硫酸铜（CuSO4•5H2O），6.0g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O），溶于500ml水，在搅拌下加入300ml 10％NaOH溶液，用水稀释至1升，储存在塑料瓶（或内壁涂有石蜡的瓶子）。该试剂可以长期保存。如果在储存瓶中出现黑色沉淀物，则需要对其进行重新配制。
2台设备：
可见光分光光度计，15个大试管，涡旋混合器等
三，双缩脲法的实验步骤
1标准曲线的确定：将12个试管分为两组，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml蛋白质标准溶液，用水补足1ml，再加入4ml缩二脲试剂。摇匀后，在室温（20?25℃）下放置30分钟，并在540nm下测量颜色。第一个不含蛋白质溶液的试管是空白对照溶液。取两组测量值的平均值，绘制标准曲线，以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标。
2样品测定：取2到3个试管，并使用相同的方法确定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不应超过10mg / ml。
四、双缩脲法的实验试剂清单
| 序号 | 名称 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 双缩脲试剂 | HC1616 | ||
| 2 | NaCl | JT0001 | 7647-14-5 | |
| 3 | 硫酸铜 | JT1362 | 7758-99-8 | |
| 4 | 硫酸铵 | JT10921 | 7783-20-2 | |
| 5 | Tris缓冲液 | HC1277 | ||
| 6 | 牛血清白蛋白 | SS2163 | 9048-46-8 | |
| 7 | 酪蛋白琼脂 | PYJH50108 | ||
| 8 | NaOH | JT8650 | 1310-73-2 | |
| 9 | 酒石酸钾钠 | LSH44301 | 304-59-6 |
