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细胞凋亡中磷脂酰丝氨酸外翻实验（实验原理，所需的试剂，实验步骤，注意事项）
Release Time：2020-07-30一、凋亡过程中磷脂酰丝氨酸外翻实验原理
凋亡过程中磷脂酰丝氨酸外翻实验中磷脂酰丝氨酸（PS）通常位于细胞膜的内侧，但在凋亡的早期阶段，PS会从细胞膜的内侧翻转到表面，暴露在细胞外环境中。膜粘连蛋白-5是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，可以高亲和力与PS特异性结合。 膜粘连蛋白-5标记有荧光素，标记的膜粘连蛋白-5用作荧光探针，可通过荧光显微镜检测细胞凋亡的发生。
碘化丙啶（PI）是一种核酸染料。它不能穿透完整的细胞膜。然而，在细胞凋亡和死亡细胞的中后期，PI可以穿透细胞膜并使细胞核染成红色。因此，匹配的膜粘连蛋白-5和PI可以将凋亡早期和晚期的细胞与死细胞区分开。
二、凋亡过程中磷脂酰丝氨酸外翻实验所需的材料
PBS缓冲液，碘化丙啶（PI），胰蛋白酶，结合缓冲液，膜粘连蛋白-5，荧光显微镜等
三、凋亡过程中磷脂酰丝氨酸外翻实验步骤
1悬浮细胞染色用PBS洗涤正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞（0.5?1×106）两次，加入100ul结合缓冲液和10ulFITC标记的膜粘连蛋白-5，在室温下避光30分钟，加入5ul PI（50ug / ml），在黑暗中反应5分钟，加入400ul结合缓冲液，并使用FACScan立即进行流式细胞仪定量检测（通常不超过1h）。同时，用一管不添加膜粘连蛋白-5-FITC和PI用的细胞液作阴性对照。
2首先用0.25％的胰蛋白酶来消化贴壁培养的细胞，之后进行的染色，洗涤，分析和上述悬浮细胞的方法相同。
3爬片细胞的染色和上述悬浮细胞的方法相同，最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜观察。
四、凋亡过程中磷脂酰丝氨酸外翻实验注意事项
1.整个操作应尽可能轻柔，不要用力吹电池。
2.在操作过程中，请远离光线，并在反应后一小时内尽快进行测试。
五、细胞凋亡中磷脂酰丝氨酸外翻实验试剂清单
| 序号 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | PBS缓冲液 | HC2031 | ||
| 2 | 碘化丙啶PI染色液 | HC0616 | ||
| 3 | 胰蛋白酶 | SS2236 | 9002-07-7 |
