聚乙二醇沉淀法检测CIC实验 (实验原理,所需的材料,实验步骤,注意事项,需要的试剂)
Release Time:2020-07-30一、聚乙二醇沉淀法CIC检测实验原理
聚乙二醇沉淀法检测CIC实验中,PEG具有可以抑制CIC的解离,并可以促进CIC进一步聚合成更大的聚集体后以使其沉淀。向测试的血清中添加低浓度的PEG可以使IC沉淀在血清中。 CIC的存在和含量可以通过比浊法或散射比浊法来测定。
二、聚乙二醇沉淀法CIC检测实验所需材料
※ 硼酸盐缓冲液
※ PEG-NaF稀释剂:量取PEG6000 40.9g,量取NaF 10.0g,溶解于BBS溶液中,加至1000mL,用G3或G4玻璃滤器进行过滤。
※ 热聚合的人IgG:取10ml人IgG(10mg / ml),在搅拌下滴加100uL 1.8%戊二醛,在24h后用100uL 0.4mol/LpH5.4Tris-HCl缓冲液终止反应,通过Sepharose 4B柱,用0.01mol / LpH7.4磷酸盐缓冲液洗脱,并收集第一个蛋白质峰。分装后将牛血清白蛋白添加至0.5%,并储存在-40°C下。
三、聚乙二醇沉淀法CIC检测实验步骤
(1)量取0.15ml待测血清,加0.3ml BBS(1:3稀释);
(2)依次加入每种溶液(待测血清的最终稀释度为1:33,PEG的最终浓度为3.64%);
(3)将对照管和测试管放在37℃水浴60分钟;
(4)用分光光度计在495nm的波长处测量吸光度,并用对照管将其调零。正常人的浊度值的平均值加上2个标准差被认为对CIC是阳性的。
四、聚乙二醇沉淀法CIC检测实验注意事项
(1)低密度脂蛋白会导致浊度增加,因此应空腹采集血液;
(2)高血脂含量以及标本反复冷冻和融化会在IC测试中引起假阳性。
五、聚乙二醇沉淀法检测CIC实验试剂清单
序号 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
1 | PBS缓冲液 | HC2031 | ||
2 | 硼酸盐缓冲液 | HC0810 | ||
3 | PEG6000 | CG0344 | 25322-68-3 | |
4 | 氟化钠 | JT0551 | 7681-49-4 | |
5 | 戊二醛 | HC0672 | ||
6 | Tris HCl缓冲液 | HC2026 | ||
7 | 牛血清白蛋白 | SS2163 | 9048-46-8 |