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3H同位素渗入法检测细胞增殖 （3H同位素渗透法,细胞增殖,实验简介,所需的材料,实验步骤,试剂清单）
Release Time：2020-07-29一、3H同位素渗透法检测细胞增殖实验简介
3H同位素渗透法检测细胞增殖实验中在有丝分裂原的刺激下淋巴细胞产生增殖反应,DNA和RNA的合成显着增加。如果将3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）添加到培养基中,它可以被转化细胞吸收。测量标记的淋巴细胞的辐射强度可以反映淋巴细胞的增殖程度。
二、3H同位素渗透法检测细胞增殖实验所需的材料
细胞培养基,小牛血清,台盼蓝染色液,Hanks平衡盐溶液,PBS缓冲液,3H-TdR,闪烁液
筛网,49型玻璃纤维滤纸,96孔培养板,手术器械,多头细胞收集器,超净工作台,液体闪烁器。
三、3H同位素渗透法检测细胞增殖实验步骤
1.脾细胞悬液的制备
?无菌地取出脾脏,并将其放入装有适量无菌Hanks平衡盐溶液的小板中。用镊子将脾脏轻轻撕成单个细胞悬液。通过200目筛网过滤,用Hanks平衡盐溶液洗涤3次,每次离心10分钟。在2 mL的完全培养基中将细胞悬浮,并用台盼蓝染色计数活细胞数。最后,用RPMI1640完全培养基将细胞数调节至5×106细胞/ mL。
2.淋巴细胞增殖反应
将脾细胞悬液添加到96孔培养板中,每孔200μL,将每个脾细胞悬液分成6孔,在3孔中加入ConA,而在另外3孔中不添加ConA作为对照。放置在5％的CO2和37°C的条件下孵育72h。培养的最后6h,向每个孔中加入20μL的3H-TdR,将细胞收集在玻璃纤维滤纸上,待滤纸完全干燥后,将其放入量瓶中,添加7 mL闪烁液,用液体闪烁器测量每分钟的脉冲数。
四、3H同位素渗入法检测细胞增殖实验试剂清单
| 序号 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | PBS缓冲液 | HC2031 | ||
| 2 | 台盼蓝染色液 | HC1731 | ||
| 3 | Hanks平衡盐溶液 | HC1153 |
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