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普鲁卡因小鼠腹腔注射LD50的测定（实验简介,实验步骤,注意事项,实验所需试剂清单）
Release Time：2020-07-29一、普鲁卡因小鼠腹腔注射LD50的测定实验简介：
普鲁卡因小鼠腹腔注射LD50的测定实验中小鼠腹腔注射LD50的测定实验中给药剂量和动物死亡率之间呈正态分布，以对数剂量为横坐标，以死亡率为纵坐标，可获得对称的S形曲线，两端是平坦的，中间是陡峭的，表明两端剂量略有变化时，死亡率变化不易显示，斜率最大，死亡率为50％，当剂量略有变化时，死亡率变化最明显，即最敏感，在技术上也最容易准确测量，因此人们经常选择LD50值作为反映药物的指标。如果将死亡率转换为概率单位，则对数剂量和概率单位线性相关，可以使用数学方法拟合回归方程，该方程可以准确计算LD50和引起任何死亡率的剂量以及相关数据。
二、普鲁卡因小鼠腹腔注射LD50的测定实验步骤
1.预测试目的是找出引起0％和100％动物死亡的剂量范围，以便可以在正式实验中确定每组的剂量。通常取9至12只小鼠，并分成3至4组。选择两组之间较大距离的一系列剂量进行腹膜内注射，观察症状并记录死亡人数以找出0％和100％死亡率。至少应找到引起20％至80％死亡率的剂量范围，以确保剂量效应曲线跨越足够的范围。引起0％和100％动物死亡的小鼠普鲁卡因腹膜内注射（ip）剂量范围的参考值为：最小剂量（Dmin）121.3 毫克/千克，最大剂量（Dmax）290 毫克/千克。
2.剂量计算和药液制备
（1）剂量计算
根据预测试的结果找出Dmax和Dmin，将形式实验中的剂量组数设置为n，将常用剂量比设置为r，然后每组的剂量为Dmax·rk-1，其中k为组，一般选择4至5组动物，r为0.6至0.85。
示例已知的普鲁卡因Dmin = 121.3毫克/千克，Dmax = 290毫克/千克，当n = 6，r = 0.84时，每组的剂量为：
| 1 | 290 mg/kg | |
| 2 | 290 毫克/千克×0.84 = 243.6毫克/千克2 | 290毫克/千克×0.84 = 243.6毫克/千克 |
| 3 | 290 毫克/千克×0.842 = 204.6毫克/千克3 | 290毫克/千克×0.842 = 204.6毫克/千克 |
| 4 | 290 毫克/千克×0.843 = 171.9毫克/千克4 | 290毫克/千克×0.843 = 171.9毫克/千克 |
| 5 | 290 毫克/千克×0.844 = 144.4毫克/千克5 | 290毫克/千克×0.844 = 144.4毫克/千克 |
| 6 | 290 毫克/千克×0.845 = 121.3毫克/千克6 | 290毫克/千克×0.845 = 121.3毫克/千克 |
①药源充足时的分配方法
配制最高浓度的液体（母液）
小鼠腹腔注射量为0.2ml / 10g = 20ml / kg，每组中的药液量约为4ml。为了腾出空间，将每组动物所需的液体量设置为6ml。
计算所需的母液量（V）和所需的母液量（M）
V =每组动物所需的药液量/（1-r）= 6 /（1-0.84）= 37.5ml
M = V´Dmax /（20ml / kg）= 37.5´（290 / kg）/(20ml/kg)=543.75mgM = V´Dmax /（20ml / kg）= 37.5´（290 / kg）/（20ml /公斤）= 543.75mg
每个剂量组的药水稀释如下：
| 1 | 543.75mg +生理盐水至37.5ml，混合均匀 | 第一组服用6ml |
| 2 | 31.5ml + 6ml生理盐水，混合均匀 | 第二组取6ml |
| 3 | 31.5ml + 6ml生理盐水，混合均匀 | 第三组取6ml |
| 4 | 31.5ml + 6ml生理盐水，混合均匀 | 第四组取6ml |
| 5 | 31.5ml + 6ml原盐，混合均匀 | 第五组取6ml |
| 6 | 31.5ml + 6ml生理盐水，拌匀 | 第六组药液 |
每组所需的母液体积（毫升）为：
| 第一组 | 6 |
| 第二组 | 6´r |
| 第三组 | 6´r2 |
| 第四组 | 6´r3 |
| 第五组 | 6´r4 |
| 第六组 | 6´r5 |
药物总量（M）=母液总体积´Dmax /（20ml / kg）
计算完V和M后，取药量M，用生理盐水稀释至Vml，用移液管准确吸取各组所需的母液量，再用生理盐水稀释至6ml，这是检验每组的液体。
3.动物分组：雄性和雌性小鼠分开。分别称重，将相同重量段（例如18.0-18.9g）的小鼠放入笼中，并标记小鼠。将雌性和雄性小鼠分层并按体重顺序随机分为6组，这样，不同性别和体重的小鼠可以平均分布在每组中，每组10只。
4.给药：每组动物腹膜内注射相应浓度的0.2ml / 10g药物溶液，并立即进行详细观察，并记录动物的反应，时间和死亡人数。在24小时内进行多次观察，然后每天观察7至14天以上。根据Bliss方法和其他方法计算LD50和95％置信极限（由于Bliss方法的复杂性，可以使用相关软件进行处理）。
三、普鲁卡因小鼠腹腔注射LD50的测定实验注意事项：
（1）随机性：在实验中可以控制的因素应尽可能平衡，对难以控制的因素也应严格随机化。分组时，应先将不同的性别分开，然后将不同的权重分开，然后随机分配。该方法称为分层随机分组。
（2）剂量按几何级数排列，换算成对数后，剂量是等距的，便于计算结果和估计误差。相邻高，低剂量之比一般为1：0.6?1：0.85，剂量距离小，结果更准确，但太小则反应率反过来。剂量距离的大小也与给药途径有关。在静脉内给药的情况下，剂量距离可以太小，而在胃内给药的情况下，其距离可以适当地更大。
（3）药物和给药途径应主要为静脉注射，腹膜内注射和胃内给药。选择的途径必须包括推荐的临床给药途径。
（4）LD50受实验中许多因素的影响，例如动物品系，性别，年龄，饥饿和饱腹感，以及环境因素，例如室温，湿度，光线和时间（早晨和下午）。比较两种药物的毒性时，应尽可能在相同条件下进行，以减少采样误差。
（5）在实验过程中，应详细记录动物的中毒症状和可能的死亡原因。如有必要，应解剖死动物并用肉眼观察。如果发现组织病变，可以进行组织学检查。通常，动物死亡通常是在给药后1天内发生的，但所有测试均应观察7天以上。如果出现中毒反应延迟或进行，应根据实际情况延长观察时间。如果发现不同动物性别之间的中毒反应和死亡率有显着差异，则应选择更为敏感的性别进行实验。
（6）当药物的毒性很小并且以最大浓度和最大体积给药后仍未检测到致命毒性时，可以确定最大耐受剂量：即在临床试验中使用给药途径并使用动物可以忍受的最高浓度。每天给动物一次或两次最大剂量剂量（至少20只小鼠，雄性一半，一半），并观察7天。详细记录动物的反应。不引起死亡的最大剂量是最大耐受量。
四、实验所需试剂清单：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 苦味酸 | TDZ000182 | 13850-16-3 | |
| 2 | 盐酸普鲁卡因 | HXH501533 | 51-05-8 |
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