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Native-PAGE生物实验（实验类别,实验步骤,实验所需试剂）
Release Time：2020-07-23一、常见的Native-PAGE实验类别
二，Native-PAGE实验方法
1，蓝色天然BN-PAGE
※ 蓝色本机PAGE是最传统，最悠久的本机PAGE实验技术。是一种常用的电泳方法，使用考马斯亮蓝作为染料进行电泳分离后的蛋白质鉴定。该方法的缺点是考马斯亮蓝和蛋白质的组合起到去污剂的作用，但可能导致复合物的分离。因此，它对蛋白质修复基团的化学发光或荧光液体或荧光染料液体的标签具有潜在的灭火作用。
※ Blue Native PAGE在分析蛋白质-蛋白质相互作用和膜蛋白质复合物方面具有很大的特点，其分离范围为100KDa-10MDa。在Blue native PAGE过程中，考马斯亮蓝是该过程中最重要的化合物。除了溶解之外，蛋白质表面还将结合大量考马斯亮蓝染料并带负电荷，这将使碱性蛋白质的pH值达到7.5。它还迁移到阴极。然而，尽管蛋白质具有大量负电荷，但其分离是基于不连续的凝胶梯度（逐渐减小的凝胶孔径），蛋白质最终迁移到其自身的大小类似于凝胶孔的大小。并且在分离膜蛋白的过程中，由于它们带负电荷，因此不会导致蛋白聚合并与酸性染料结合。膜蛋白也从疏水性变为亲水性，溶解度大大提高。
2，Clear Native PAGE技术
Clear Native PAGE是一种电泳技术，可以通过染色以外的方法（例如SLS）来鉴定蛋白质。但是，这种方法的最大应用是研究蛋白质间相互作用，尤其是与质谱联用。
Clear Native PAGE是一种电泳技术，可以分离聚丙烯酰胺凝胶（PI小于7）中的酸性水溶性蛋白和膜蛋白。分辨率通常低于BN-PAGE。迁移距离在于蛋白质的固有电荷和凝胶直径的大小。因此，BN-PAGE比CN-PAGE更广泛地使用。但是，当考马斯天然??混合物的染料分析妨碍进一步分析时，CN-PAGE具有优势。例如，为了测量催化活性（例如线粒体ATP合酶）或分离痕量的膜蛋白以进行荧光共振能量分析，CN-PAGE比BN-PAGE温和，尤其是在使用洋地黄皂苷的情况下。 CN-PAGE可以维持膜蛋白的超分子组装，而BN-PAGE的结构会引起分解。可以通过CN-PAGE检测线粒体ATPase中具有酶促活性的寡聚体，但不能检测到蓝色天然（BN-PAGE）。
CN-PAGE源自无色非变性PAGE，这是BN-PAGE之后出现的一种技术。由于CN-PAGE中没有带电的染料，因此蛋白质在电场中的迁移完全取决于蛋白质的固有电荷。大分子和寡蛋白必须具有合适的物理参数性质才能够在CN-PAGE中分离，特别重要的是PI低于5.4，则分辨率较低。从这个角度来看，CN-PAGE除了获得未染色的蛋白质外，在分析膜蛋白方面没有优势。优点是条件相对温和，在蛋白质组学研究中具有很大的优势。 BN-PAGE和CN-PAGE的缓冲液与电泳条件相同，但是CN-PAGE的阴极缓冲液不含考马斯染料，但将0.025％的洋地黄皂苷添加到了凝胶中。
3，QPNC-PAGE技术简介
QPNC-PAGE（定量制备性天然连续聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种高分辨率技术方法，QPNC-PAGE应用于生物化学以及生物有机化学实验中，基于等电点分离蛋白质技术，生物科学家们使用这种凝胶电泳技术方法来独立鉴定活性或天然金属蛋白的样品，正确或错误折叠的与金属辅因子结合的可溶性蛋白的混合物。
三，Native-PAGE实验所需试剂
| 序号 | 名称 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 洋地黄皂苷 | YZM018816 | 11024-24-1 | |
| 2 | 标准蛋白质溶液 | HC1785 | ||
| 3 | 聚丙烯酰胺 | HCC340648 | 9003-05-8 | |
| 4 | 考马斯亮蓝 | SX0132 | 2353-45-9 | |
| 5 | 荧光染料 | SS2050 | 210892-23-2 | |
| 6 | SDS | SS0013 | 151-21-3 | |
| 7 | (R,S)-ATPA | BSH88010 | 140158-50-5 |
