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测植物组织中游离氨基酸含量（实验目的,实验介绍,实验原理,实验步骤,实验注意事项）
Release Time：2020-07-23一、测植物中游离氨基酸实验目的
测植物中游离氨基酸的含量，对于研究植物在不同条件，不同生长发育阶段的氮代谢变化以及植物对氮的吸收，运输，吸收和营养状况具有重要生物学意义。
二、测植物中游离氨基酸的实验原理
游离氨基酸的氨基可与茚三酮反应生成蓝紫色化合物，其颜色与游离氨基酸的含量成正比。
三、测植物中游离氨基酸需要的设备与试剂
分光光度计电子天平； 3个漏斗（直径6厘米）；适量的滤纸； 3个容量瓶（25ml或50ml）； 7个20ml带刻度的试管； 3个移液器0.5ml，1个5ml;试管架;玻璃棒；塑料膜（密封试管口）；吸水纸;适量的镜头清洁纸；耳球；剪刀;移液器架橡皮筋，电烤箱;水浴（包括铁丝网篮）。
| 序号 | 产品 | CAS号 | 货号 | 备注 |
| 1 | 茚三酮 | 485-47-2 | FQ0049 | |
| 2 | 95%乙醇 | 64-17-5 | JT26000 | |
| 3 | 氰酸钠 | 917-61-3 | SS1804 | |
| 4 | 醋酸钠 | 127-09-3 | SS1335 | |
| 5 | 冰醋酸/乙酸 | 64-19-7 | JT11990 | |
| 6 | 亮氨酸 | 3588-60-1 | SS3676 | |
| 7 | 异丙醇 | 67-63-0 | JT25997 |
1. 3％茚三酮试剂
称取3g茚三酮并将其与95％乙醇溶解在100ml容量瓶中，并将其保存在棕色烧瓶中。该试剂应存放在阴凉处，不要长时间存放，使用期限约为10天。
2.氰酸盐缓冲液（准备如下）：
（1）NaCN储备溶液0.01mol / L（490mg / L）。
（2）乙酸缓冲液：在约300ml无氨蒸馏水中称取360g乙酸钠（含三分子结晶水），加入66.67ml冰醋酸，用无氨蒸馏水稀释至1L。
取20ml溶液（1），并用溶液（2）稀释至1L。
3.准确称重在80℃下干燥的13.1mg亮氨酸（或8.9mgα-丙氨酸）中的标准氨基酸，将其溶于10％异丙醇中，并在100ml容量瓶中使用10％异丙醇将乙醇稀释至刻度并充分混合以形成1mmol / L标准氨基酸储备液，并保存在冰箱中。为了制备工作溶液，可以将储备溶液与等量的无氨蒸馏水混合。该溶液的浓度为0.5mmol / L，即1ml含有0.5μmol的氨基酸或7μg的氨基氮。
4. 95％乙醇； 5.异丙醇（分析纯）。
四、测植物中游离氨基酸的实验步骤
1.标准曲线的制备取18个20ml带刻度的试管，并按照表15-1添加试剂。加入试剂后，充分混合，在100°C的水浴中加热12分钟（加热时密封），取出并在冷水中快速冷却，立即在每支试管，塞子，摇匀中加入5ml 95％的乙醇加热时，管子剧烈运动以形成红色产物。红色产物在空气中被氧气氧化并褪色，此时溶液为蓝紫色。在570nm的波长处测量其光密度（以空白管为参照），以氨基酸浓度为横坐标，以光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求线性方程。
2.提取样品时，选择代表性的植物叶子（或其他组织），洗净并擦干，切开并混合，然后快速称重0.10?0.20g（取决于氨基酸含量），总共称重3份，然后添加分别在20毫升带刻度的试管中，向瓶盖中加入10毫升蒸馏水（或附有塑料薄膜），并将其置于沸水浴中20分钟以提取游离氨基酸。然后将其取出并在自来水中冷却。将上清液过滤到25ml容量瓶中，然后将5ml蒸馏水加到试管中，将其放在沸水浴上加热10分钟，反复过滤并冲洗残留物，最后使体积达到刻度并好好摇一摇。
五、测植物中游离氨基酸的实验结论
游离氨基酸的氨基可与茚三酮进行反应生成蓝紫色的化合物，其颜色与游离氨基酸的含量成正比，更加颜色可判断出氨基酸的含量。
