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如何做Southern杂交实验
Release Time：2020-07-22一、Southern杂交实验的基本介绍：
Southern杂交实验是分子生物学最经典的实验方法之一。Southern杂交实验的基本原理是，需要将检测的DNA样品固定在固相的载体之上，然后再与标记好的核酸探针进行杂交，并与探针具有同源序列的固相DNA位置，显示出交叉信号。 Southern杂交实验可以确定出来是否有与探针同源的片段以及检测到的DNA样品中片段的长度。某些Southern杂交技术被广泛应用于遗传疾病的检测过程中、DNA指纹检测分析、以及PCR产物判断中。但由于Southern杂交技术的操作繁琐而且耗时长，因此，目前已经有其他更加具备效率的实验方法可以替代Southern杂交实验技术。但该技术也具有其独特的实用性和普及性，无法通过其他方法进行代替，例如片段多态性检测（RFLP）。
二、Southern 杂交实验所需材料及试剂：
①实验变性溶液：0.5M的 NaOH； 1.5 M的氯化钠。
②实验中和溶液：1.5M氯化钠; 1M Tris-HCl（pH 7.4）；
③试验用转移溶液（20×SSC）：NaCl 175.3g；NaOH调节pH值至7.0，柠檬酸三钠82.2g，加入ddH2O至1000ml。
④过滤用的一次性有机系针头滤器 尼龙(NY)膜 13mm 0.22um(绿）
二、Southern 杂交实验步骤
Ⅱ、基因组DNA消化产物的琼脂糖凝胶电泳
Ⅲ、DNA从琼脂糖凝胶转移到固体支持物
①碱变性：在室温下将凝胶浸入数倍于变性溶液体积的凝胶中30分钟。
②中和：将凝胶转移到中和溶液中15分钟。
③根据凝胶的大小转移切割NC膜或尼龙膜，并切掉一个角作为标记。浸入水中后，将其浸入转移溶液中5分钟。切一张长为3mm的Whatman滤纸，将其稍稍宽于膜作为盐桥，然后压紧（转移过程通常需要8-24小时，每隔几个小时更换一次湿纸巾。将转移液切成20的大小×凝胶3-5张滤纸和大量纸巾备用SSC。注意在膜和胶之间不应有气泡，在整个操作过程中，要防止膜污染其他污垢。
④转移后，取出NC膜，将其浸入6×SSC溶液中几分钟，以洗去膜上污染的凝胶颗粒，将其置于两张滤纸之间，在80°C下烘烤2小时，然后将其夹在中间两层滤纸之间的NC膜，保存在干燥的地方。
Ⅳ、探针标记
1. 用于Southern杂交的探针，通常采用放射性物质标记或用地高辛标记。重复标记灵敏度高，效果好；地高辛标记的有点在于没有半衰期，同时具备良好的安全性。
2. 探针标记方法包括：随机引物法，上翻译法以及末端标记法。
五、Southern 杂交实验所需试剂清单：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS号 | 备注 |
| 1 | Nacl | JT0001 | 7647-14-5 | |
| 2 | Agarose | SF0014 | 9012-36-6 | |
| 3 | NaOH | JT8650 | 1310-73-2 | |
| 4 | 一次性有机系针头滤器 尼龙(NY)膜 13mm 0.22um(绿） | F-NY1322 |
