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怎么给转染细胞的γ-gal原位染色
Release Time：2020-07-22一、转染细胞的γ-gal原位染色实验简介：
二、转染细胞γ-gal原位染色实验所需的材料和试剂：
1.实验用固定液：0.05％戊二醛D-PBS（储存在4°C条件下），含2％甲酰胺；
2. 85ml的蒸馏水：10ml 10XD-PBS（不含钙和镁）（11mM KHPO4、27mM KCl，81mM Na2HPO4·7H2O，1.4mM NaCl）
3. 0.2ml戊二醛（25％解）、5ml福尔马林（37％甲醛解）；
4. 染料：5mM亚铁氰化钾，D-PBS含有5mM铁氰化钾，2mM氯化镁（在4°C下储存）。
5. 底物/染料解：染料解包含有1mg / ml X-gal
三、转染细胞的γ-gal原位染色实验的步骤
2.用2ml D-PBS（含钙和镁）洗涤细胞一次；
3.使用1ml固定剂在室温下固定细胞大约5分钟。
4.用2ml D-PBS清洗每个孔两次。
5.向每个孔中加入1毫升底物/染料解，并在室温或37°C下与硫酸铵孵育2小时。
6.向每个孔加入2ml的D-PBS缓冲液进行冲洗，在倒置显微镜下进行观察细胞，并估计出蓝色细胞（β-gal阳性）的比例。
7.为了保存培养板，向每个孔中加入1毫升含10％福尔马林的PBS，放置10分钟。用D-PBS冲洗并在4°C下储存在PBS中。
四、转染细胞的γ-gal原位染色实验注意事项：
1.准备不含青霉素或链霉素的完全培养基。
2.加入0到22微升50毫克/毫升的GENETICIN抗生素解（终浓度0-1100μg/ ml完全培养基，以100ug / ml梯度进行增加）。
3.使用引导酶消化细胞并替换为4000细胞/毫升。
4.在6孔板的每个孔中加入100微升细胞悬液，并在每个孔中预先加入2毫升含替代GENETICIN的孔
五、转染细胞的γ-gal原位染色实验所需试剂清单：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 1000ul蓝吸头 | FT-1000 | ||
| 2 | Tris-HCl | HC2055 | ||
| 3 | PBS | HC1488 | ||
| 4 | 铁氰化钾 | FF0073 | 13746-66-2 | |
| 5 | 甲酰胺 | HXH504144 | 75-12-7 |
