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对染色体R显带技术的介绍
Release Time：2020-07-22一、染色体R显带技术的基本介绍：
※ 染色体R显带技术实验中，目前尚不完全了解R带的机制，高温（80?90℃）处理会引起染色体蛋白质的变化，G波段中AT富集区在高温下变性并表现出特殊的染料亲和力，但在R波段，AT富集区却不表现出染料亲和力，因此会出现浅色区域，通过电子显微镜的观察进一步表明，这些带与带间区域之间的差异主要是由于电子密度的差异，由R带显示的深带和浅带区域与G带的带区域相对，即，G带的深染色区域的R带为浅色区域，反之亦然。
※ 由于此技术显示的深度和浅带模式与G波段正好相反，因此称为反向G波段，因此也称为R波段。G波段染色体的两端均未显示深色，而R波段则显示为深色。因此，R带对于确定染色体的长度和末端区域的结构变化是有用的。
二、染色体R显带技术所需的材料及试剂：
胸腺嘧啶核苷、5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）、吖啶橙工作液、秋水仙素、Hank溶液、Hoechst-33258工作溶液、磷酸盐缓冲液、Giemsa稀释液、Earle溶液、离心管、离心机。
三、染色体R显带技术的实验步骤
1.在常规外周血培养72小时后进行标本制备，然后，加入胸腺嘧啶核苷使终浓度为0.3μg/ ml，并继续培养17小时。
2.在无菌条件下，用Hank溶液洗涤两次以除去残留的胸苷溶液，然后将外周血培养物转移到另一个新鲜的培养液中，同时加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU），使生长培养基的最终浓度为10μg / ml，并将其在37°C的黑暗环境中放置5小时。
3.培养终止：按照常规的外围培养量加入秋水仙素，并在37°C下继续培养2至4小时，然后根据常规培养进行离心，低渗，固定和制片。
4.制作R带时，将载玻片放在Hoechst-33258工作溶液中20分钟，或在吖啶橙工作液中染色5分钟，然后用pH 6.8磷酸盐缓冲液冲洗两次。
5.将样品放在恒温水浴中的电加热金属板上，然后用pH = 6.8的磷酸盐缓冲液覆盖玻璃载玻片，使液体在约45度的恒温下保存。
6.使用垂直于玻璃载玻片的8 W紫外灯，其上覆盖pH = 6.8磷酸盐缓冲溶液。灯泡和载玻片之间的距离约为5厘米。照射15-20分钟，然后用蒸馏水冲洗两次。
7.将玻片浸入86℃的Earle溶液中1?2分钟，然后用蒸馏水洗涤两次并冷却。
8.用1:20 Giemsa稀释液染色10分钟，然后干燥。
9.显微镜检查和核型分析：用低倍显微镜观察并计数到油镜，然后选择分裂相。显微照相后，根据R波段染色体的特征进行分析以检测异常。
四、染色体R显带技术注意事项：
1.染色体玻片不能用火干燥，但只能自然干燥以获得更好的结果。
2. R录像带的生产不需要经过高温干燥，并且存储时间不会太长。
3.紫外线灯的照射时间与伯液处理时间成反比。如果紫外线灯的照射时间较长，则在Earle溶液中的处理时间会较短。
五、染色体R显带实验所需的试剂清单：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | Hanks平衡盐溶液(含酚红) | HC1153 | ||
| 2 | β-胸苷 | SS0954 | 50-89-5 | |
| 3 | 磷酸盐缓冲液 | HC1488 | ||
| 4 | 秋水仙素荧光素 | BSH87942 | 66091-34-7 | |
| 5 | 吉氏色素 | SX0115 | 51811-82-6 | |
| 6 | 2ml圆底连盖离心 | F-EP020 | ||
| 7 | 1.5ml尖底连盖离心管 | F-EP015 | ||
| 8 | Hoechst-33258工作溶液 | HXH500950 | 23491-45-4 | |
| 9 | 5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU） | SS0879 | 59-14-3 | |
| 10 | 吖啶橙 | LSH65851 | 494-38-2 | |
| 11 | Earle’s平衡盐溶液(无钙镁糖酚红) | HC1154 |
