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采用盐析法纯化抗体技术
Release Time：2020-07-21一、采用盐析法纯化抗体的实验原理
盐析法纯化抗体是基于在待纯化免疫血清中加入饱和硫酸铵溶液，由于抗体也是一种蛋白质，蛋白质在水溶液中的溶解度是由其本身携带的亲水基团数和电荷数决定的，当我们向抗血清中加入饱和硫酸铵溶液后，硫酸根离子和铵根离子与抗体竞争溶液中的水分子，而硫酸根离子和铵根离子比抗体分子具有更强的亲水性，因此抗体分子表面的水化膜被破坏，同时其暴露出来的带电基团被溶液中的盐离子所中和进而导致其溶解度大大降低，依据此原理从而将其从抗血清中分离。
二、盐析法纯化抗体实验所需材料
硫酸铵；抗血清；PBS缓冲液；离心管；离心机等。
三、采用盐析法纯化抗体的实验步骤
1.将5ml抗血清与0.01M PBS在离心管内等体积混合，向其中加入10ml饱和硫酸铵溶液，边滴加边摇匀，然后置于2到8摄氏度静置过夜。
2.将步骤1中的待分离物于离心机内离心，8000r/min离心15到20分钟，除上清。
3.将步骤2中离心后的沉淀用2ml 0.01M PBS 溶解，然后缓慢加入3ml 饱和硫酸铵溶液，边滴加边摇匀，然后置于2到8摄氏度静置2小时。
4.将步骤3中的待分离物于离心机内离心，8000r/min离心15到20分钟，除上清。
5.将步骤4中离心后的沉淀用1.65ml 0.01M PBS 溶解，然后缓慢加入3.35ml 饱和硫酸铵溶液，边滴加边摇匀，然后置于2到8摄氏度静置2小时。
6.将步骤5中的待分离物于离心机内离心，8000r/min离心15到20分钟，除上清。
7.将步骤6中离心后的沉淀用1ml 0.01M PBS 溶解, 转移到MD 14000透析袋内，用0.01 M PBS进行透析，透析4次以上，每次至少1小时以上。
四、盐析法纯化抗体实验所需的试剂清单
| 序号 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | PBS缓冲液 | HC2031 | ||
| 2 | 硫酸铵 | JT10921 | 7783-20-2 | |
| 3 | 5ml圆底连盖离心管 （灭菌） | F-EP050-H |
