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测定过氧化氢酶(CAT)的活性
Release Time：2020-07-21一，过氧化氢酶(CAT)简单介绍
植物中的黄素氧化酶代谢产物通常含有H 2 O 2，例如光呼吸中的乙醇酸氧化酶和呼吸中的葡萄糖氧化酶。 H2O2的积累会导致破坏性氧化。过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）是去除H2 O2的重要保护酶。它们可以将H2 02分解为O2和H2 O，从而保护人体免受H2 O2的有害影响。其活性与抗逆性密切相关。
二，测定过氧化氢酶(CAT)实验原理
（CAT）催化以下反应：
2 H2 O2→2 H2 O + O22 H2 O2→2 H2 O + O2， 在该实验中，通过测量H2O2的还原来确定CAT的活性。
在H 2 O 2存在下，过氧化物酶可以氧化愈创木酚产生棕色的4-邻甲氧基苯酚。活性可以通过用分光光度计测量产物的含量来确定。
三，测定过氧化氢酶(CAT)实验结果计算
CAT和POD的酶活性以U / 毫克蛋白或U / 克 FW表示。
四，测定过氧化氢酶(CAT)的实验步骤
酶溶液的制备
1.称取0.25g的叶子，加入5倍于pH7.0的（M / V）PBS，并在冰浴中以15000r / min的速度研磨。
离心15分钟以取一部分上清液，并适当稀释以用于酶活性测定。
2. CAT活性的测定
在3毫升反应体系中，包括0.3％H2 02 1毫升，H2 0 1.95毫升，最后加入0.05毫升酶溶液
开始反应，并测量240 nm波长下POD的降低率。 POD每分钟降低0.01定义为1个活力单位。
3.POD活性的测定
在3毫升的反应系统中，加入1毫升的0.3％H 2 O 2，0.95毫升的.0.2％Guaiacol，1毫升的pH 7.0 PBS。最后，加入0.05毫升酶溶液以开始反应，并记录在470纳米处的POD增加速率。POD每分钟增加0.01定义为1个活力单位。4.使用考马斯亮蓝G-250方法测定蛋白质含量。
五，测定过氧化氢酶(CAT)实验所需试剂
1.50毫摩尔/升 pH7.0磷酸盐缓冲液
2.0.3％H2 02：吸取0.5毫升 30％H2 02并向50毫升中添加pH 7.0磷酸盐缓冲液
3.0.2％愈创木酚：称取0.2克愈创木酚，并向100毫升中添加pH 7.0磷酸盐缓冲液
| 序号 | 名称 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 植物过氧化氢酶(CAT)溶液 | HC0933 | ||
| 2 | H 2 O 2 | HCR207671 | 7722-84-1 | |
| 3 | 葡萄糖 | SC0001 | 50-99-7 | |
| 4 | 乙醇 | JT26000 | 64-17-5 | |
| 5 | 磷酸盐缓冲液PBS | HC1488 | ||
| 6 | 愈创木酚 | SS4114 | 90-05-1 | |
| 7 | 考马斯亮蓝 | SX0132 | 2353-45-9 |
