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梯度凝胶电泳实验实操
Release Time：2020-07-21一、梯度凝胶电泳简单介绍
二、梯度凝胶电泳的实验步骤
三、梯度凝胶电泳实验的优点：
①首先，梯度凝胶的分离范围比单浓度凝胶宽，并且可以同时分离分子量范围更大的蛋白质。单凝胶电泳无法分离分子量超过其分离范围，太大或太小的蛋白质。梯度凝胶的孔径范围大于单个凝胶的孔径范围。分子量较大的蛋白质可以在凝胶顶部的大孔部分中分离，而分子量较小的蛋白质可以在凝胶底部的小孔部分中分离，因此分子量越来越大。小蛋白质可以同时分离。例如，4％-30％的梯度凝胶可以分离分子量为50,000至2百万的蛋白质。
②另一个优点是梯度凝胶可以区分分子量差异较小且不能在单一浓度的凝胶中分辨的蛋白质。在电泳过程中，蛋白质在梯度凝胶中迁移，并且其穿过的孔径越来越小，直到凝胶的孔径不可渗透为止，因此蛋白质在电泳过程中被浓缩并在凝胶中浓缩。一个非常狭窄的区域。分子量稍小的蛋白质可以向前迁移并集中在稍向前的区域。随着梯度凝胶的孔径逐渐变小，它将对蛋白质不可渗透的孔附近的蛋白质产生浓缩作用。因此，电泳后会形成一个非常狭窄的区域，可以分辨出分子量差异小的蛋白质。对于太稀的样品，可在电泳过程中将样品添加几次，不同大小的蛋白质分子最终将停留在其相应的凝胶孔中并被分离。
③天然状态下的蛋白质分子量可以直接测定而无需解离成亚基。因此，该方法可以补充通过SDS-PAGE测量分子量的方法。梯度凝胶电泳主要适用于测定球蛋白的分子量，但会产生较大的纤维蛋白误差。
?由于必须在未知蛋白质和标准蛋白质分子达到完全防止迁移的孔径时确定分子量，因此在电泳过程中应使用较高的电压。例如，一块平板凝胶厚度为0.5mm，使用600V电压和50mA电流，大约需要2个小时。
四，梯度凝胶电泳实验所需要的试剂清单
| 序号 | 名称 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 聚丙烯酰胺 | HCC340648 | 9003-05-8 | |
| 2 | 丙烯酰胺 | LSH54449 | 79-06-1 | |
| 3 | 磷酸盐-SDS电泳缓冲液 | HC1305 | ||
| 4 | SDS-PAGE蛋白加样缓冲液 | HC1297 | ||
| 5 | 肌球蛋白 | SS2170 | 100684-32-0 | |
| 6 | 十二烷基磺酸钠（SDS） | JQ0017 | 2386-53-0 |
