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噬菌体培养方法(液体培养法,双层琼脂培养方法,琼脂表面培养方法)
Release Time：2020-07-08一、噬菌体培养菌液体培养法
1.在适当的温度下，通常在16至24小时内，以液体培养方法培养指定的宿主细菌。
2.将100μl噬菌体原液与300μl宿主细菌悬浮液混合，并使其感染15分钟。
3.将混合溶液连接到装有10 ml新鲜液体培养基的试管中，并在适当的温度下摇动并培养约8至24小时。培养时间取决于噬菌体。
4.将培养基转移到离心管中，并以10,000 rpm（5,000 g）离心10分钟以沉淀宿主细菌。
5.将上清液转移至新试管中，并用孔径为0.22μm的过滤器除去残留细菌，以获得不含宿主细菌的噬菌体原液。但是，由于噬菌体原液是透明的，因此不能用肉眼直接判断其增殖效果，因此应测定其效价以确认增殖培养的有效性。
| 序号 | 产品 | CAS号 | 货号 | 备注 |
| 1 | 琼脂培养基 | PYJH51095 | ||
| 2 | 90*15mm培养皿 | FM-90-X | ||
| 3 | 10ml离心管 | F-EP100 |
二、噬菌体培养双层琼脂培养方法
1.在适当的温度下，通常在16至24小时内，以液体培养方法培养指定的宿主细菌。
2.将100μl噬菌体原液与300μl宿主细菌悬浮液混合，并使其感染15分钟。
3.将混合物加入5 ml冷却至45°C的0.7％琼脂培养基中，均匀混合，然后立即将其放在倒入的1.8％琼脂培养基板上。
4.板固化后，将其移至合适温度的培养箱中。培养时间通常为8至24小时。培养时间取决于噬菌体。
5.遵循与上述相同的步骤，制作另一个没有噬菌体的对照组。
6.将培养板的清晰度与对照组进行比较。通常，含有噬菌体的板是透明的，而仅含有宿主细菌的对照组是浑浊的。
7.将含有噬菌体的板在-20°C下放置4?5小时后，将其取出并在室温下融化。
8.将解冻的液体转移到离心管中，并以10,000 rpm（5,000 g）离心10分钟，以沉淀宿主细菌。
9.将上清液转移到新试管中，并用孔径为0.22μm的滤器除去残留细菌，以获得不含宿主细菌的噬菌体原液。
三、噬菌体培养琼脂表面培养方法
1.在适当的温度下，通常在16至24小时内，以液体培养方法培养指定的宿主细菌。
2.将3 ml的宿主细菌悬浮液均匀地分散在1.8％琼脂培养基板上，静置2小时。
3.吸出剩余的宿主细菌悬浮液，然后将0.3 ml的噬菌体原液均匀地涂在板上。
4.在适当的温度下孵育约16至24小时。孵育时间取决于噬菌体。
5.将5 ml新鲜液体培养基添加到平板上，并用L形玻璃棒刮擦平板表面上的细菌。
6.将刮取的液体转移到离心管中，并以10,000 rpm（5,000 g）离心10分钟以沉淀宿主细菌。
7.将上清液转移至新试管中，并用孔径为0.22μm的滤器除去残留细菌，以获得不含宿主细菌的噬菌体原液。
