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琼脂糖凝胶电泳常见问题与解决办法
Release Time：2020-07-07一、琼脂糖凝胶电泳简单介绍：
琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶。琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂 糖，琼脂糖的熔点在62?65°C之间，融化后在37°C下可维持液态数小时，30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶 由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。
二、琼脂糖凝胶电泳凝胶制备
| 序列 | 产品名称 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 琼脂糖 | SF0012 | 9012-36-6 |
（1）总液体体积不得超过三角烧瓶体积的50％。
（2）将2％或更多的胶水溶液设置为中火。
（3）当胶液剧烈沸腾时，停止加热，取下三角瓶，请戴上耐热手套，小心摇动三角瓶，然后再次加热，胶会沸腾直至胶变透明，确保琼脂糖完全溶解了
2.琼脂糖电泳图像的背景模糊：如果琼脂糖没有完全溶解，则电泳图像的背景将模糊。完全溶解的琼脂糖凝胶是透明的，并且锥形瓶的内壁上不应有琼脂糖颗粒粘附。
3.加热后，水蒸发。如有必要，应添加热蒸馏水以弥补原始重量并摇匀。
三、琼脂糖凝胶电泳
1. DNA条带模糊且拖尾。
（1）DNA降解。避免核酸酶污染。
（2）DNA负载过多。减少凝胶中DNA的负载量。
（3）过时的电泳缓冲液：多次使用电泳缓冲液后，离子强度降低，pH值升高，缓冲容量降低，影响电泳效果。建议经常更改运行缓冲区。
（4）电泳条件不合适。电泳时的电压不应超过20 V / cm，温度应低于30℃，巨大的DNA链应低于15℃。检查所使用的电泳缓冲液是否具有足够的缓冲能力。
（5）类DNA盐太高。游泳前，先用乙醇沉淀除去多余的盐。
（6）存在蛋白质污染。电泳前先提取蛋白质。
（7）DNA变性。电泳前无需加热，请用20 mM NaCl缓冲液稀释DNA。
2. DNA条带较弱或无DNA条带。
（1）DNA负载量不足：增加DNA负载量。
（2）DNA降解：避免DNA核酸酶污染。
（3）DNA脱离凝胶：缩短电泳时间，降低电压并增加凝胶浓度。
（4）具有相似分子大小的DNA条带不容易区分。增加电泳时间并使用正确的凝胶浓度。
（5）DNA变性：电泳前请勿在高温下加热DNA链。用20 mM NaCl缓冲液稀释DNA。
（6）DNA链很大，不适合常规的凝胶电泳。脉冲凝胶电泳分析。
3. DNAMARKER带变形。
（1）用于制备凝胶的缓冲液和电泳缓冲液不能同时制备。使用同时准备的缓冲液。电泳过程中，缓冲液应比液位高1?2 mm。
（2）电泳时电压过高。您可以在电泳前15分钟使用较低的电压（3 V / cm），并在条带从孔中出来后调整电压。
（3）尽可能缓慢地添加样品，并在样品自然沉降后施加电压。
