C11 BODIPY 581/591,细胞脂质过氧化探针

BODIPY581/591 C11 使用方法（活细胞成像分析）

1、染色工作液的准备

1.1 储存液的制备：将低温保存的 C11 BODIPY 581/591 干粉从冰箱取出后置于室温至少 20min，低速离心后，加入高质量 DMSO 配制成适宜浓度的储存液，比如：10mM 储存液（即：往 1mg C11 BODIPY 581/591加入 198μl DMSO，充分溶解后混匀即可），根据单次用量分装，≤-20℃保存，尽量避免反复冻融。

1.2 工作液的制备：C11 BODIPY 581/591 用于活细胞染色的建议工作浓度一般是 1-10 μM，请根据细胞类型和实验目的，参阅文献，再根据实际应用摸索最佳工作浓度。用培养基或生理缓冲液稀释 10mM 储存液到所需的工作浓度，现配现用！

2. 染色步骤

2.1 细胞铺板，37℃孵育过夜；

2.2 用待研究药物处理细胞；

2.3 加入一定量的 10mM C11 BODIPY 581/591 储存液使其终浓度为 10μM。（或开始做实验做下浓度优化，

测定几个浓度梯度）。37℃孵育 30min。

2.4 吸走培养基，用 PBS 清洗三次；

2.5 荧光显微镜测定荧光。还原态染料用 Ex/Em=581/591nm（Texas Red 滤片）；氧化态染料用

Ex/Em=488/510nm（FITC 滤片）来测定。

2.6 590m/510nm 发射光下测定的荧光读数比值反映细胞脂质过氧化水平。

3. 图像处理和分析

分别使用传统的 Texas Red(590nm)和 FITC（510nm）发射滤片来进行荧光成像。

通过定量荧光强度和计算分别在 Texas Red(590nm)和 FITC（510nm）通道下测定荧光得比值来反映过氧化

水平。