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厌氧培养箱操作实验（操作,实验简介,实验步骤,注意事项,所需试剂）
Release Time：2020-08-05一、厌氧培养箱操作规范实验简介：
厌氧培养箱操作过程中厌氧培养的原理有两个方面：一是去除与培养基接触的空气中的氧气；二是去除厌氧菌。二是增强培养基的还原能力，以达到吸收氧气的目的，使微生物处于厌氧环境。
二、厌氧培养箱操作规范实验步骤
（一）.在手术室中形成厌氧环境
1.根据使用要求放置必要的附件和器皿，然后将两个无毒的塑料袋放入手术室。
2.打开电源以打开灯，打开温度控制器，并调节所需的温度和安全温度。
3.将1000克钯颗粒（封闭）和500克干燥剂放入手术室，并放置美兰指示器（封闭）。
4.紧紧关闭取样室内外的门，并进行真空检查。
5.手术室中的第一次更换（氮气更换）：
（1）首先将橡皮管插入手术室的进气口，然后将另一端插入塑料袋。
（2）连接氮气入口，打开氮气控制阀，使两个塑料袋充满氮气，然后拧紧袋口。
（3）将乳胶手套放在观察板的法兰环上并绑紧。
（4）逐渐将氮气放入手术室的塑料袋中，直到所有氮气都释放出来。
6.对手术室的第二次更换（更换氮气）重复进行氮气填充过程，并随时注意用脚踏开关打开和关闭排气装置。
7.手术室的第三次更换（混合气体更换）：
（混合气体的比例为：N2：H2：CO2 = 85％：10％：5％）
（1）改变风路，打开混合风路阀以吸入空气。充电时，必须随时打开和关闭脚踏开关以排气。
（2）用塑料袋装满混合气后，关闭混合气直通阀（三通阀），将混合气通过流量计输入并调节流量计，流量约为每分钟10毫升。
（3）将塑料袋中的混合气体逐渐排入手术室。
（4）经过三次通风后，手术室气体中的氧气含量一直处于很小的状态。
8.打开手术室中的钯颗粒脱气器，打开脱气器催化转化器的电源以进行催化脱氧，一小时后打开Meilan指示器（Melan安瓿瓶）以观察其变色。如果颜色没有变化，则说明操作室已达到厌氧环境。
9.打开紫外线消毒灯，在室内消毒。灭菌时间是自定的。
（二）.菌株的放置和培养
1.检查并关闭采样室的门。
2.将细菌放入采样室后，打开采样室的外门并关闭外门。
3.采样室充满氮气并更换三次：首先，真空度为500 mmHg（66Kpa）并停止，然后手动打开氮气阀，指针在下一次操作之前返回零位。
4.如果选择的真空度较低，则需要增加更换次数。
5.打开和关闭采样室内部和外部的门。必须抽真空100 mmHg（13Kpa）进行检查和帮助操作。
6.接种棒灭菌器的应用：
（1）随时使用镍铬电热丝使电极短路，以致变红进行灭菌（接种棒）
（2）可以直接放置蜡的熔点，并旋转试管的蜡密封口以融化蜡。
7.可以在手术室中任意选择和控制培养箱中的温度。
8.调节混合气瓶和氮气瓶的输出压力：调节减压阀，使输出压力约为0.1Mpa三、厌氧培养箱操作规范实验注意事项：
菌株的放置和培养时，厌氧培养箱需要长期连续使用条件：
（1）每天打开手术室的美兰指示器进行观察，并在正常条件下使用。如果异常，则必须重新通风。
（2）必须长时间连续输入少量混合气体，以使添加的氢气可以通过催化吸收与少量氧气结合，以确保室内厌氧状态和室内空气的流量。添加的混合气体选择为每分钟约10毫升。
（3）连续培养一天，脱氧剂和干燥剂更换一次。
四、厌氧培养箱操作实验所需试剂清单：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 牛血清白蛋白 | SS2163 | 9048-46-8 | |
| 2 | 考马斯亮蓝G250 | SX0040 | 6104-58-1 | |
| 3 | 乙醇 | CCF12679 | 127852-29-3 | |
| 4 | 磷酸 | JT11391 | 7664-38-2 | |
| 5 | Na2WO4·2H2O（钨酸钠 二水合物） | JT0691 | 10213-10-2 | |
| 6 | Na2MoO4·2H2O（钼酸钠 二水合物） | JT0836 | 10102-40-6 | |
| 7 | 磷酸 | JT11391 | 7664-38-2 | |
| 8 | Li2SO4·H2O（硫酸锂 一水合物） | JT1753 | 10102-25-7 | |
| 9 | 溴水（Bromine） | HCC300289 | 7726-95-6 | |
| 10 | 酚酞指示剂 | HC0247 | ||
| 11 | Na2CO3（无水碳酸钠） | JT8648 | 497-19-8 | |
| 12 | 氢氧化钠（NaOH） | JT8650 | 1310-73-2 | |
| 13 | CuSO4·5H2O（五水硫酸铜） | JT1362 | 7758-99-8 | |
| 14 | 酒石酸钾钠 | LSH44301 | 304-59-6 |
