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叶绿素理化性质的测定（试验测定介绍,实验所需试剂,实验步骤,测定结果,）
Release Time：2020-08-04一、叶绿素的理化性质测定介绍
叶绿素的理化性质测定中叶绿素是由二羧酸-叶绿素，甲醇和植醇形成的复合酯，因此它可以与碱反应生成醇（甲醇和植醇）和叶绿素的盐。得到的盐可以在降解的水中，通过这种方法分离出叶绿素和类胡萝卜素。叶绿素和类胡萝卜素都具有光学活性，并显示出一定的吸收光谱，可以通过光谱学检查或用分光光度计精确测量。叶绿素吸收光量子并将其转换为激发光。处于激发态的叶绿素分子非常不稳定，当其返回基态时，它可以发出红光量子，从而产生荧光。
叶绿素的化学性质非常不稳定，很容易被强光破坏。特别是当叶绿素与蛋白质分离时，它破坏了转化，而类胡萝卜素则相对稳定。叶绿素中的镁可以被H +代替，从而代替棕色脱镁叶绿素，剩余的铜将变成绿色的叶绿素铜。叶绿素铜非常稳定，在光照下不易破坏。因此，该方法通常用于制造绿色多肉植物。植入标本。
二、叶绿素的理化性质测定需要的试剂
1、仪器：20ml带刻度的试管； 10ml小试管；试管架;分光镜石棉网药勺烧杯（100毫升）;酒精灯玻璃棒;铁三角架带刻度的移液器2ml，每个5ml；比赛。
2、试剂：95％乙醇；苯;醋酸铜粉； 5％稀盐酸；
3、醋酸铜醋酸溶液：在100ml 50％的醋酸中加入6g醋酸酮替代物，然后加入4、倍蒸馏水进行置换；
4、KOH-甲醇溶液：将20g KOH溶于100ml甲醇中，过滤并放入带橡胶塞的试剂瓶中。
| 序号 | 产品 | 货号 | CAS号 | 备注 |
| 1 | 乙醇 | JT26000 | 64-17-5 | |
| 2 | 苯 | JT24024 | 71-43-2 | |
| 3 | 醋酸铜 | JT1352 | 142-71-2 | |
| 4 | 醋酸 | JT11990 | 64-19-7 | |
| 5 | 氢氧化钾 | JT0012 | 1310-58-3 | |
| 6 | 甲醇 | JT25999 | 67-56-1 |
三、叶绿素的理化性质试验测定步骤
将匀浆物用叶绿体颜料的乙醇溶液和水研磨，并进行以下实验。
1.光对叶绿素的破坏作用
（1）取4个小试管，分别向其中两个中加入5ml水磨碎的叶片匀浆，另外两个中分别加入2.5ml叶绿体色素乙醇提取物，并使用95％乙醇消耗两次。
（2）取1个装有叶绿素乙醇提取物的试管和1个用水磨碎的叶片均质化的试管，将其置于直射光下，将另两个置于黑暗中。 40分钟后，比较并观察颜色变化。解释原因。
2.荧光观察
取20毫升刻度试管，加入5毫升浓叶绿素色素乙醇提取液，观察溶液在直射光下的透射光和反射光之间的区别。解释原因。
3.皂化（绿色和黄色颜料的分离）
（1）在已观察到荧光现象的叶绿体颜料乙醇提取物的试管中加入1.5ml 20％KOH-甲醇溶液，并摇匀。
（2）过一会儿，加入5ml苯，摇匀，然后沿试管壁缓慢加入1?1.5ml蒸馏水，轻轻混合（不要剧烈摇动），然后将其放在试管架上用于分层。如果溶液没有分层，请使用滴管吸取蒸馏水，将其沿管壁滴下，并在滴下时摇动，直到溶液开始分解，然后静置。可以看出，解决方案逐渐分为两层。下层是稀有的乙醇溶液，其中溶解有皂化的叶绿素a和b（以及少量的叶黄素）。上层是溶于黄胡萝卜素和叶黄素的苯溶液。
4.吸收光谱的观察
使用分光镜观察上述渐变试管溶液对两种类型颜料的吸收光谱。首先，将下部绿色颜料部分对准光孔，以查看光谱如何变化；然后将上面的黄色颜料溶液对准光孔。查看频谱如何变化。用简单的图形显示观察结果。
5. H +和Cu2 +对叶绿素分子中Mg2 +的取代作用
方法一：
（1）取两个试管，在第一个试管中加入2ml叶绿体色素提取物作为对照。在第二个试管中加入5ml叶绿体色素提取物，然后加入几滴5％HCl，摇匀，观察溶液的颜色变化。
（2）当溶液变成棕色时，加入少量乙酸铜粉末，稍微加热，观察并记录溶液的颜色变化，并将其与对照试管进行比较。解释颜色变化的原因。
方法二：
再取20毫升乙酸铜醋酸溶液，并将其放入烧杯中。取两片新鲜植物叶子，将它们放入烧杯中，用酒精灯缓慢加热，随时观察并记录叶子颜色的变化，直到颜色不再变化为止。原因。
四、叶绿素的理化性质试验测定结果
1.在低温下进行皂化反应的叶绿体颜料溶液易于乳化，并出现白色絮状物，该溶液浑浊且不分层。可以剧烈摇晃并在30-40°C的水浴中加热。溶液会迅速分层，絮状物消失，溶液将变得透明透明。
2.用于分离颜料的圆形滤纸，必须在中心打出一个小圆孔，周围整齐，否则分离出的颜料不是同心圆。
