人类基因组DNA提取(实验简介,实验所需试剂,实验步骤,注意事项,实验所需试剂清单)
Release Time:2020-07-31一、人类基因组DNA提取实验简介:
二、人类基因组DNA提取实验所需试剂:
三,人类基因组DNA提取实验步骤:
1.细胞分裂和RNase /蛋白酶K消化
①将100微升抗凝全血放入1.5ml Ep离心管中,然后加入100微升裂解物和20微升RNaseA /蛋白酶K溶液,来回吸打混合,并在55°C孵育35min将离心管倒置来回几次直到溶液是水溶性的。
②加入10微升的3M NaAc(pH 4.8),然后加入1250微升的结合缓冲液,充分摇匀以在12,000 rpm下离心30秒。
2. DNA与吸附柱结合
用移液管转移上清液,并将其加入离心吸附柱(设置收集管)中,静置1min以离心12,000 rpm30秒,然后将废液丢弃在收集管中。注意:待转移的上清液约为1300微升,而离心吸附柱的容量约为650微升,因此每次需要将650微升的上清液转移至离心吸附柱,进行离心处理,将废液丢弃在收集管中,然后重复实验操作步骤3。
3. DNA的纯化
①在离心吸附柱(设置收集管)中加入600微升洗涤缓冲液(洗涤缓冲液),以离心12,000 rpm30秒。
②重复步骤4一次,以离心12,000 rpm3分钟以完全除去洗涤缓冲液。
③小心取出离心吸附柱,弃去收集管,将离心吸附柱放入干净的1.5ml Ep离心管中,向离心吸附柱添加50微升分离缓冲液(洗脱缓冲液)(代替缓冲液,必须添加在离心吸附柱的中央)静置1min,以离心12,000 rpm30秒。
④取出装有提取的基因组DNA的Eppendorf离心管。
4. DNA的琼脂糖凝胶电泳
取8-10微升基因组DNA,加入2微升上样缓冲液,充分混合,将样品加入1%琼脂糖凝胶斑点中,然后进行电泳。
四,人类基因组DNA提取实验所需试剂清单:
序列 | 产品名 | 货号 | CAS号 | 备注 |
1 | 1000ul蓝吸头 | FT-1000 | ||
2 | 200ul黄吸头 | FT-200 | ||
3 | 2ml圆底连盖离心 | F-EP020 | ||
4 | 10ul白吸头 | FT-10 | ||
5 | 1.5ml尖底连盖离心管 | F-EP015 | ||
6 | 蛋白酶K | JG0098 | 67-63-0 | |
7 | NaAc | TDZ001793 | 132302-25-1 |