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人类基因组DNA提取(实验简介,实验所需试剂,实验步骤,注意事项,实验所需试剂清单)

Release Time:2020-07-31

一、人类基因组DNA提取实验简介:
人类基因组DNA提取实验中所用细胞裂解液裂解细胞膜,收集细胞核,添加SDS破坏核膜,使用蛋白酶K将核蛋白降解为小片段,然后从DNA上解离,通过苯酚-氯仿提取去除蛋白质,然后用无水乙醇,75。用%乙醇洗涤DNA沉淀物,真空干燥,并溶解在TE中以获得高分子量DNA。

二、人类基因组DNA提取实验所需试剂:
1.5ml Ep离心管,蛋白酶K溶液,NaAc,1000ul蓝吸头
,人类基因组DNA提取实验步骤:
1.细胞分裂和RNase /蛋白酶K消化
①将100微升抗凝全血放入1.5ml Ep离心管中,然后加入100微升裂解物和20微升RNaseA /蛋白酶K溶液,来回吸打混合,并在55°C孵育35min将离心管倒置来回几次直到溶液是水溶性的。
②加入10微升3M NaAc(pH 4.8),然后加入1250微升的结合缓冲液,充分摇匀以在12,000 rpm下离心30秒。
2. DNA与吸附柱结合
用移液管转移上清液,并将其加入离心吸附柱(设置收集管)中,静置1min离心12,000 rpm30秒,然后将废液丢弃在收集管中。注意:待转移的上清液约为1300微升,而离心吸附柱的容量约为650微升,因此每次需要将650微升的上清液转移至离心吸附柱,进行离心处理,将废液丢弃在收集管中,然后重复实验操作步骤3。
3. DNA的纯化
①在离心吸附柱(设置收集管)中加入600微升洗涤缓冲液(洗涤缓冲液),以离心12,000 rpm30秒。
②重复步骤4一次,以离心12,000 rpm3分钟以完全除去洗涤缓冲液。
③小心取出离心吸附柱,弃去收集管,将离心吸附柱放入干净的1.5ml Ep离心管中,向离心吸附柱添加50微升分离缓冲液(洗脱缓冲液)(代替缓冲液,必须添加在离心吸附柱的中央)静置1min,离心12,000 rpm30秒。
④取出装有提取的基因组DNA的Eppendorf离心管。
4. DNA的琼脂糖凝胶电泳
8-10微升基因组DNA,加入2微升上样缓冲液,充分混合,将样品加入1%琼脂糖凝胶斑点中,然后进行电泳。
,人类基因组DNA提取实验所需试剂清单:
序列 产品名 货号 CAS号 备注
1 1000ul蓝吸头 FT-1000    
2 200ul黄吸头 FT-200    
3 2ml圆底连盖离心 F-EP020    
4 10ul白吸头 FT-10    
5 1.5ml尖底连盖离心管 F-EP015    
6 蛋白酶K JG0098 67-63-0  
7 NaAc TDZ001793 132302-25-1  

以上为人类基因组DNA提取实验请选用高质量试剂。


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