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沙门氏菌检测实验（实验介绍,材料和试剂,检验程序,操作步骤,细菌类型,实验结果）
Release Time：2020-07-31一、沙门氏菌测试介绍
二、沙门氏菌测试材料和试剂
1、移液器（1ml，10ml），恒温培养箱（36±1℃，42℃），冰箱，匀浆器，振荡器，培养皿，稀释瓶，天平，显微镜，接种棒等。
2、生化试剂和培养基
蛋白water水，缓冲蛋白胨水（BP），靛蓝基质试剂，尿素琼脂（pH 7.2），四硫酸钠纯净绿（TTB）富集液，氯化镁孔雀石绿富集液，三糖铁琼脂，亚硒酸胱氨酸（SC）富集液，亚硫酸铋琼脂（BS），糖发酵管，SS琼脂，氰化钾（KCN）培养基ONPG培养基，半固体琼脂，DHL琼脂，HE琼脂，WS琼脂，，氨基酸脱羧酶测试培养基，丙二酸钠钠，沙门氏菌因子血清：26种类型用于初步分型； 57种类型用于进一步键入； 163种类型用于详细键入。
| 序号 | 产品 | CAS号 | 货号 | 备注 |
| 1 | 90*15mm培养皿 | FM-90-X | ||
| 2 | 蛋白胨 | 68308-36-1 | SS6091 | |
| 3 | 氯化镁孔雀绿肉汤（MM） | PYJH50136 | ||
| 4 | 四硫磺酸盐煌绿增菌液（TTB肉汤） | PYJH50538 | ||
| 5 | 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液 | PYJH51513 | ||
| 6 | 亚硫酸铋琼脂（BS） | PYJH50134 | ||
| 7 | DHL琼脂/胆硫乳琼脂（DHL） | PYJH50131 | ||
| 8 | HE琼脂（HE） | PYJH50137 | ||
| 9 | WS琼脂 | PYJH50145 | ||
| 10 | SS琼脂 | PYJH51791 | ||
| 11 | 三糖铁琼脂（TSI） | PYJH50993 | ||
| 12 | 尿素琼脂（pH7.2） | PYJH50627 | ||
| 13 | 氰化钾（KCN）培养基 | 151-50-8 | HCC340707 | |
| 14 | 氨基酸脱羧酶 | |||
| 15 | ONPG培养基 | PYJH50362 | ||
| 16 | 丙二酸 | 141-82-2 | SY0095 |
三、沙门氏菌测试检验程序
沙门氏菌测试程序如下：
四、沙门氏菌测试操作步骤
取25克测试样品，并向均质杯中加入225毫升缓冲蛋白胨水。使用均质机以8000?10000r / min的速度粉碎1分钟，在36±1℃下孵育4h（干蛋培养18?24h），转移10mL，然后转移至100mL氯化镁孔雀石绿富集溶液（MM）或四硫酸在42°C的钠明亮绿（TTB）浓缩溶液中孵育18-24小时。同时，将另外的10 mL转移到100 mL亚硒酸甘氨酸（SC）富集溶液中，并在36±1°C下培养18-24小时。
2、沙门氏菌的分离
取一圈浓缩溶液，并将其接种在亚硫酸铋琼脂平板和DHL琼脂平板上。可以将两种浓缩液划线并同时接种在同一板上。在36±1℃下培养18?24h（DHL）或40?48h（BS），观察每个平板上生长的菌落。沙门氏菌Ⅰ，Ⅱ，Ⅳ，Ⅴ，Ⅵ和沙门氏菌Ⅲ的菌落特征见表1。
表1各种选择性琼脂平板上沙门氏菌的菌落特征
3.沙门氏菌的生化检验
直接从选择性琼脂平板上挑几个可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂。肠杆菌科常见属和种的反应结果见表2。表2大肠杆菌科各属在三糖铁琼脂中的反应结果
注意：在三糖铁琼脂中，只能排除在斜坡上产生酸且对硫化氢（H2S）呈阴性的菌株。其他反应结果可能是沙门氏菌，也可能不是沙门氏菌。
4、接种三糖铁琼脂时，接种蛋白质胨水（用于靛蓝基质测试），尿素琼脂（pH 7.2），氰化钾（KCN）培养基和赖氨酸脱卡泊酶测试培养物基础培养基和对照培养基各一支，于36℃培养±1℃18-24小时，必要时可延长至48小时，结果根据表3判断。根据反应序号，沙门氏菌的结果应属于A1，A2和B1，其他5个反应结果可以排除。
表3肠杆菌科各属生化反应初步鉴定表
5、反应序列号A1：典型反应被判定为沙门氏菌。如果尿素，KCN和赖氨酸这三项之一异常，则可以根据表4判断为沙门氏菌。如果存在两个异常，则根据A3判断为弗劳地氏柠檬酸杆菌。
表4
6、反应编号A2：组成甘露醇和山梨糖醇试验，并根据表5判断结果。
表5
7、反应序列号B1：组成ONPG。 ONPG-十是大肠杆菌，ONPG-是沙门氏菌。同时，沙门氏菌应为赖氨酸+，而副伤寒沙门氏菌A应为赖氨酸-。
8、如有必要，根据表6确定沙门氏菌生化组。
表6沙门氏菌生化组的鉴定
9、血清学鉴定
具体内容见GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌测试》中6.4。
五、沙门氏菌测验细菌类型的判断和结果
综合以上生化试验和血清学分型鉴定的结果，按照GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌测试》中表8或有关沙门氏菌属抗原表判定菌型，并报告结果。
注：本文参照GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌测试》
