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概述蛋白质分析技术(实验介绍,实验步骤,注意事项,所需试剂)

Release Time:2020-07-22

一,分离蛋白质的简单介绍
蛋白质的类型特性、系统以及蛋白质分离和纯化的目的不同,因此不能有固定的实验程序来分离各种类型的蛋白质,但这并不意味着蛋白质的分离和纯化没有一定的规则,蛋白质分离也有一定的规律可循。

二、分离蛋白质实验步骤
分离蛋白质中大多数分离和纯化工作具有相似的实验步骤和方法。蛋白质分离和纯化的一般程序:
生物组织细胞→破碎→离心→盐析,等电沉淀→凝胶过滤,离子交换色谱,亲和色谱和高效液相色谱。
三,分离蛋白质的注意事项
蛋白质含量受性别,年龄,季节,喂养条件和培养条件等众多因素的影响。此外,不同生物体和同一生物体的不同组织细胞的蛋白质含量和分布也有很大差异。在正常和病理条件下,它们的蛋白质蛋白质的组成和含量也有很大差异,这是分离和纯化蛋白质时应注意的事项。选择材料后,通常对其进行预处理,以去除不必要的结缔组织和脂肪组织,使其尽可能接近生命状态。处理后,应立即使用或冷藏。当制备一些容易在体内分解的活性蛋白质,酶或蛋白激素时,通常宜使用新鲜的材料。
四,分离蛋白质所需的试剂
蛋白质的分离和纯化应首先考虑选择合适的材料。人体手术标本,培养的细胞,动物组织和微生物是蛋白质的主要来源。材料的选择应基于测试目的和以下原则:
※ 目标蛋白质含量高;
※ 材料容易获得。
※ 如何破坏细胞和组织
除了提取体液外,一些细胞外多肽激素,蛋白质,酶不需要破坏细胞,为了分离和纯化细胞和多细胞生物组织中的各种蛋白质,需要提前破坏细胞和组织以破坏细胞。充分释放蛋白质。不同生物或同一生物的不同组织在破坏细胞方面有不同的难度,并且使用方法也不同。例如:胰腺,肝脏和脑组织通常很柔软,可以用普通的均质机磨碎。肌肉,心脏组织坚韧,需要预先压碎然后匀浆;许多微生物的细胞壁坚韧,需要自溶,冷热交替,打磨,超声波和压力处理。已经建立了许多破坏细胞并释放细胞内含物的方法。表面活性剂一般常用的是十二烷基磺酸钠(SDS),NP-40和脱氧胆酸,Triton X-100。
序号 名称 货号 CAS 备注
1 氨基酸多肽 JSH62552  13589-02-1  
2 标准蛋白质溶液 HC1785    
3 Triton X-100 SS0049 9002-93-1  
4 十二烷基磺酸钠(SDS) JQ0017 2386-53-0  
5 Tergitol
NP-40
SS6064 9016-45-9  
6 脱氧胆酸溶液 HC1888    


 
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