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测定苯丙氨酸氨裂解酶（PAL）的活性
Release Time：2020-07-18一、实验原则
苯丙氨酸氨裂合酶（PAL）催化苯丙氨酸的脱氨基反应，使NH 3释放形成反式肉桂酸。该酶在植物次生生物质（如木质素等）的代谢中起重要作用。根据其产品，反式肉桂酸在290 nm处的吸光度变化可以确定酶的活性。
二、实验材料，仪器和试剂
| 序号 | 产品 | CAS号 | 货号 | 备注 |
| 1 | 硼酸 | 10043-35-3 | JT0008 | |
| 2 | 四硼酸钠 | 1330-43-4 | JT0599 | |
| 3 | 苯丙氨酸 | PYJH50891 | ||
| 4 | 胆固醇 | 57-88-5 | JT0008 | |
| 5 | 巯基乙醇 | 60-24-2 | JT27316 | |
| 6 | 聚乙烯吡咯烷酮 | 9003-39-8 | CG0277 | |
| 7 | 石英砂 | 14808-60-7 | JT0062 | |
| 8 | 乙醇 | 64-17-5 | JT26000 |
（2）设备：1.紫外分光光度计； 2.离心机； 3.砂浆； 4.吸滤瓶； 5.红灯装置； 6.打孔器。
（3）试剂：1. 0.05mol / L硼酸盐缓冲溶液（pH8.8）； 2. 0.02mol / L苯丙氨酸（用0.1mol / L pH8.8硼酸缓冲液制备）； 3. 5mmol / L胆固醇基硼酸乙醇缓冲液。
三、实验步骤
1.准备马铃薯薄片洗净马铃薯块茎，将其削皮，用冲头（直径1.5cm）取下圆柱体，切掉表皮附近的两端，将中间部分切成2mm厚的圆盘。首先用自来水冲洗，用蒸馏水冲洗一次，然后用纱布吸干表面。
2.光感应：将光盘放在装有湿滤纸的培养皿中，并在20?30℃的红光下放置24小时以诱导PAL（也可以接种病原体的感应）。
3.粗制酶提取物5g土豆片经诱导处理，再加10ml含5mmol / L巯基乙醇的硼酸缓冲液，0.5g聚乙烯吡咯烷酮（PVP）或PolyclarAT（去除酚类中毒，防止颜色干扰，研磨少量石英砂）通过抽吸过滤匀浆，以10,000rpm离心15分钟，上清液为粗酶提取物，在0?4℃下进行上述操作。
4.活性测定与计算1ml酶溶液加1ml 0.02mol / L苯丙氨酸，2ml蒸馏水，总体积为4ml。作为对照，不加入底物，并加入1ml蒸馏水。将反应溶液保持在30℃的恒温水浴中，并在0.5小时后用紫外分光光度计在290nm处测量吸光度。以每小时在290nm处将吸光度改变0.01所需的酶量为单位（相当于每毫升反应1μg肉桂酸）。通过福林-苯酚法测定蛋白质含量。
