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血清脂类测定方法

Release Time:2020-07-14

一、血清脂类测定方法简单介绍:
※ 目前,仅将脂蛋白中总胆固醇的测定方法作为脂蛋白的定量依据,即确定HDL,LDL或VLDL中的胆固醇,它们被称为高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。 )和低密度脂蛋白。 胆固醇(LDL-C)或极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)。这种类型的测量方法目前在临床中广泛使用,快速且相对准确。 shielding屏蔽直接测量法使用脂蛋白中的特定抗体和其他物质首先保护血浆中的LDL和VLDL免受胆固醇测量试剂的影响,同时无需离心分离直接测量未封装的HDL中的胆固醇在这种情况下,测定胆固醇含量HDL的速度快而准确。它是近年来发展起来的一项新技术,值得推广和应用。
※ 测定血清总脂质血清总脂质主要包括FC,CE,PL和TG。除了帮助诊断脂质代谢紊乱和相关疾病外,血清总胆汁淤积还可以用于总脂质增加的原发性胆汁酸肝硬化,肾病综合征或急慢性肝炎以及总脂质降低的严重肝炎,肝硬化以及其他严重的肝脏损害,恶病质,甲状腺功能亢进和吸收不良综合征等疾病。总血脂通常随年龄增长而增加,40岁以上的人血脂显着增加,65-70岁的人血脂降低。不同的测量方法在正常参考值上有一定差异。测量方法有两种:一种是提取方法,通过脂质提取剂将血清脂质引入培养基中,然后进行定量。另一种是直接测量方法,即不需要提取。实验步骤如下:
1.脂质提取方法脂质存在于血清脂蛋白中。使用甲醇或乙醇分离与蛋白质结合的脂质,并使用甲醇或乙醇的非极性有机溶剂溶解脂质。非极性溶剂(例如Bloor溶剂(醚:酒精1:3,V / V)或FovCh溶剂(氯仿:甲醇2:1,v / V),醚氯仿的混合物可以改善脂质和蛋白质的切割结合能力达到提取目的。将血清脂质提取到有机溶液中后,将其蒸发至干,除去有机溶液,并通过加热进行氧化,然后对颜色进行定量。
2.直接脂质测定法,如磺基-磷酸-香兰素法,是在血清中加入浓硫酸加热,冷却后,加入试剂显色(即SPV反应)直接测定血清中总脂质。

三,胆固醇的测定:
血清中的胆固醇包括CE和FC,酯型CE占70%,游离型FC占30%。在LACT的作用下,FC中C3的-OH可与亚油酸(43%),油酸(24%),棕榈酸(10%),亚油酸(6%),花生四烯酸(65)结合,与脂肪酸如硬脂酸(3%)混合。 LDL中血清胆固醇最高,其次是HDL和VLDL,而CM最低。血清总胆固醇的测定方法分为化学法和酶法。
1.化学方法化学方法一般包括:①提取; ②皂化; ③洋地黄的沉淀和纯化; ④分四个阶段进行显色和颜色比较。代表性方法是Sperry-Webb方法,该方法包括步骤①至④,并且在常规操作中省略了②和③。或使用省略了步骤②和③的Zak-Henly方法以及省略了步骤③的Abell-Kendall方法,现在将其用作标准参考方法。
2.酶法测定CE在胆固醇酯酶(cholesterolesterase,CHE)水解为FC和FFA的CE,然后将FC氧化为胆固醇氧化酶(胆固醇氧化酶,COD)转化为△4胆固醇和H2O2,然后定量消耗O2或产生的H2O2量或△4胆甾烯酮的量,作为FC的定量基础。该方法是目前的常规应用方法,快速准确,标本数量少,便于自动生化分析仪进行批次测定。
四,实验所需清单
序列 产品名 货号 CAS 备注
1  胆固醇(LDL-C)                                                      SC0252 57-88-5  
2 亚油酸 SY0111 60-33-3  
3 棕榈酸 DBK501283 57-10-3  
4 甲醇 JT25999  67-56-1  


 
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