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硝酸银染色
Release Time：2020-07-14一、硝酸银染色简单介绍
※ 银染的方法很多，文献报道有一百多种。但是，确切的染色机理仍不清楚。一般原则是在碱性pH值环境中，银离子将还原为金属银，并且蛋白质表面将被着色。
※ 由于银染的高灵敏度，其在凝胶上的斑点小于1 ug /蛋白质斑点，因此在二维凝胶分析中被广泛使用。找到目标蛋白斑点后，通过测试染色富集目标斑点，然后进行进一步的肽指纹分析（PMF）或序列确定。随着质谱技术的不断改进和发展，银染后直接测量 mol蛋白斑点并不困难。这是一种与质谱兼容的银染方法。
二，实验步骤如下：
| 实验步骤 | 溶液(250毫升 每 gel) | Gel-Type | |
| 1.固定 | 量取25毫升 acetic acid, 100毫升 甲醇 125毫升 milli-Q 水 |
1摩 unbacked 2x15 最少 |
1摩 on film or glass support or 1.5 unbacked 2x60 最少 |
| 2.敏化 | 量取75毫升甲醇, 0.5g Na2SO3, 17g NaAc, milli-Q 水 to 250毫升 |
30 最少 | 60 最少 |
| 3.漂洗 | 取250毫升 milli-Q 水 | 3x5 最少 | 5x8 最少 |
| 4.银染 | 取0.625g AgNO3, milli-Q water to 250毫升 | 20 最少 | 60 最少 |
| 5.漂洗 | 取250毫升 milli-Q 水 | 2x1 最少 | 4x1 最少 |
| 6.显色 | 取6.25g Na2CO3 , 100μ formaldehyde, milli-Q 水 to 250毫升 |
4 最少 | 6 最少 |
| 7.终止 | 取3.65g EDTA；milli-Q 水 to 250 毫升 | 10 最少 | 40 最少 |
| 8.漂洗 | 取250毫升 milli-Q 水 | 3x5 最少 | 2x30 最少 |
三、硝酸银染色液使用注意事项：
1.许多银染程序都使用戊二醛，可以提高银染的敏感性和染色结果的再现性，但是由于戊二醛可以修饰蛋白质，因此会影响质谱鉴定和蛋白质斑点的分析；
2.确保所有的染色容器都绝对干净，可以使用玻璃或塑料作为染色容器。
3.水的纯度对染色结果的质量有很大影响，应至少使用两次蒸馏水（电导率<2μS），如果可能，可以使用微孔水；
4.避免在染色过程中用手接触凝胶，必须戴一次性手套或无粉乳胶手套。
5.使用的化学试剂必须是分析纯的（AR）。
四、实验所需清单：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 乙酸 | JT11990 | 64-19-7 | |
| 2 | 甲醇 | JT25999 | 67-56-1 | |
| 3 | NaAc | JT0541 | 6131-90-4 | |
| 4 | AgNO3 | HCC344701 | 7761-88-8 | |
| 5 | EDTA | JH0691 | 60-00-4 | |
| 6 | 甲醛 | JT22679 | 50-00-0 |
