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染色质免疫共沉淀技术（ChIP）
Release Time：2020-07-14一、染色质免疫共沉淀技术（ChIP）简介：
二、染色质免疫共沉淀技术（ChIP）所需材料及试剂：
三、染色质免疫共沉淀技术（ChIP）步骤
（A）将细胞的甲醛交联并超声处理。
1.取出一个平板电池（10厘米平板），添加243 ul 37％甲醛，以使甲醛的终浓度为1％（培养基为9ml）。
2. 37秒10分钟。
3.终止交联：加入甘氨酸至终浓度0.125M。在培养皿中加入450ul 2.5M甘氨酸。混合后，可以在室温下放置5分钟。
4.吸出培养基，并用冰冷的PBS洗涤细胞两次。
5.细胞刮板将细胞收集在15ml离心管中（PBS为5ml，3ml和3ml）。预冷却后，以2000 rpm收集细胞5分钟。
6.倒出上清液。根据细胞数量，添加SDS裂解缓冲液，由于最终细胞浓度为每200ul 2 x 106个细胞，每100ul溶液包含1 x 106个细胞，然后添加蛋白酶抑制剂复合物，假定MCF7杂草丛生的板为5×106个细胞，这次细胞生长到大约80％，即4×106个单元，因此，向每个试管中加入400ul SDS裂解缓冲液。将2管混合在一起，总共800ul。
7.超声波破碎：VCX750，25％功率，冲击4.5S，间隙9S， 14次。
四、染色质免疫共沉淀技术（ChIP）注意事项：
最重要的一点是抗体的性质，不同的抗体和抗原结合能力也不同，在IP反应中可能不使用无染料结合，一定要仔细检查抗体的使用说明书，尤其是多克隆抗体可能是问题所在；其次，注意溶解抗原的缓冲液的性质，大多数抗原是由细胞组成的蛋白质，尤其是骨架蛋白质，必须溶解缓冲液，否则，必须使用含有强表面活性剂的缓冲液，尽管它可能会影响某些抗原和抗体的结合。
另一方面，如果使用弱表面活性剂溶解细胞，将无法完全溶解细胞蛋白，甚至溶解也会产生与其他蛋白质结合的结果，该表位被封闭，这影响了与抗体的结合，即使IP成功，也是许多蛋白质和抗体沉在一起的悲剧性结果；第三，为了防止蛋白质分解和修饰，必须在抗原溶解缓冲液中加入蛋白质抑制剂，并在低温下进行实验，在每次实验之前，首先要考虑抗体/缓冲液的比例，太少不能检测到抗原，太多不能添加到珠子中，并且保留上清液，缓冲液太少将无法溶解抗原，如果缓冲液过多，抗原将被替换。
五、实验所需试剂清单：
| 1 | 1.5ml尖底连盖离心管 | F-EP015 | |
| 2 | 2ml圆底连盖离心管(灭菌） | F-EP020-H | |
| 3 | 甘氨酸 | SS3763 |
