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PEG沉淀实验

Release Time:2020-07-14

一、PCR产物纯化方法--PEG沉淀实验简介:
PEG沉淀主要是探索一种可大量,廉价且纯度较高地纯化PCR产物的方法,最好去除200 bp以下的小DNA片段以进行DNA筛选。

二、PCR产物纯化方法--PEG沉淀实验所需试剂:
96孔PCR板、NaCl、PEG8000、离心管、离心机、EtOH、ddH2O
三、PCR产物纯化方法--PEG沉淀实验步骤
96孔PCR板操作。
1.加入20μLPCR产物5μL5M NaCl(终浓度0.5M);
2.加入25μL的24%PEG8000溶液(最终浓度为12%);拌匀
3. 4度放置30分钟;
4. 4500xg,在4度离心30min后,立即将板扣在厚吸收纸上,离心至150xg,除去上清液;
5.加入70μL的75%EtOH,4500xg,在4度下离心15分钟,立即将其快速吸附在厚吸水纸上,离心至150xg,除去上清液;重复一次;
6.在50度或室温下干燥,添加10μLddH2O溶解,这是纯化的PCR产物。站立时以1μL为模板。

四、PCR产物纯化方法--PEG沉淀实验注意事项:
1.该方法可直接用96孔PCR板操作,可大量纯化PCR产物,纯化率更高,可去除300bp以下的PCR产物。但纯化产物会包括不想要的扩增产物、未消耗的引物等,从而引起干扰。
2.用这种方法纯化的成本非常低,PEG8000,NaCl,醇几乎是常规的实验室试剂,比96孔板纯化试剂盒便宜得多,另一个突出的优点是可以除去200bp以下的片段。
3.该方法有点不利于产量的增加,适用于纯化后不需要很多的DNA实验。

五、PEG沉淀实所需试剂清单:
1 1.5ml尖底连盖离心管                                                     F-EP015  
2 2ml圆底连盖离心管(灭菌)                                  F-EP020-H  
3 96孔无裙边PCR板,透明                                                                      F-PCR-96W  
4 NaCl JT0001  
5 PEG8000溶液(无菌) HC1091  


 
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