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噬菌体滴度的测定实验（实验介绍;所需试剂;实验步骤）
Release Time：2020-07-07一、噬菌体滴度测定实验介绍
噬菌体滴度测定实验中在宿主细胞过多的情况下，噬菌斑的数目随着噬菌体的增加而线性增加。因此，在感染前，应稀释噬菌体，而不是宿主细胞。低MOI（感染重复性）的平板还可确保每个噬菌斑仅包含一个DNA序列。
二、噬菌体滴度测定实验所需试剂
| 序号 | 产品 | cas号 | 货号 | 备注 |
| 1 | LB培养基 | HC1007 | ||
| 2 | 顶部琼脂糖凝胶 | HC1421 |
1、微波炉
2. LB / IPTG / Xgal培养板
3. LB培养基
4.顶部琼脂糖凝胶
三、噬菌体滴度测定实验步骤
1.在5~10ml LB培养基中接种一个ER2537克隆，并摇动孵育直至对数中期（OD600~0.5）。
2.随着细胞的生长，将顶部琼脂糖凝胶微波加热并分配到无菌培养管中，每管3ml。保持在45℃下使用。
3.将LB / IPTG / Xgal培养板在37°C下预热并放在一旁。
4.在LB培养基中将噬菌体稀释10倍。
推荐稀释范围：108-1011，用于扩增噬菌体的培养上清液； 101-104用于未放大筛选的洗脱液。每次稀释均使用新的吸头。最好使用气溶胶屏障来避免交叉污染。
5.一旦ER2537培养物生长到对数生长期的中期，将其等分到微量离心管中，每管200ml。
6.将稀释的噬菌体上清液添加到装有细菌培养物的微量离心管中。仅将10 ml的一种稀释剂添加到微量离心管中，迅速涡旋，并在室温下孵育1-5分钟。
7.转移到装有45℃顶层琼脂糖凝胶的试管中，涡旋并快速混合，立即倒入预热的LB / IPTG / Xgal板上，然后轻轻摇动该板以均匀分布顶层凝胶。
8.将板冷却5分钟，然后在37°C下孵育过夜。
9.噬菌斑计数是基于噬菌斑计数约为100的培养皿。将噬菌斑计数乘以稀释液得到的滴度为每10毫升噬菌体噬菌斑形成单位（pfu）
