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TBS 缓冲盐溶液知识介绍

Release Time:2020-06-17
       Tris缓冲盐水(TBS)是等渗的无毒缓冲液,用于某些生化技术中,可将pH维持在相对狭窄的范围内。 提供缓冲能力的Tris浓度从10到100 mM不等。 由于TBS用于模拟生理条件(如在动物或人体中),因此pH值呈弱碱性,范围为7.4至8.0。 添加氯化钠可实现等渗(最常用的150 mM NaCl对应于生理条件:0.9%NaCl)
Tris缓冲盐缓冲液介绍
       Tris缓冲盐缓冲液(TBS)等渗且无毒。 TBS为抗原-抗体相互作用提供了最佳条件。 TBS由Tris和NaCl组成。前一种成分具有缓冲能力,而后一种成分有助于张力(相对于细胞等渗或高渗取决于NaCl浓度)。 TBS中存在变体,其Tris(10至100 mM)和NaCl(150至500 mM)的浓度不同。尽管TBS有许多变化,但在25°C下,用于1X TBS的常用“标准”配方包含0.05 M Tris和0.15 M pH 7.6的氯化钠。
Tris缓冲盐缓冲液的用途
  1. TBS在以下应用中用作清洗缓冲液;
  2. 抗体稀释剂;
  3. 在免疫测定中洗涤缓冲液;
  4. 在斑点印迹分析中用于碱性磷酸酶或过氧化物酶偶联物的洗涤缓冲液;
  5. 电极清洗缓冲液;
  6. 免疫组织化学染色;
  7. 原位杂交;
  8. pH值。
  9. 具体的TBS缓冲液应用取决于实验本身,将介质的pH值调节至7.4至8.0,一般使用HCl和NaOH调节pH值, pH 7.6的TBS可用于大多数实验。

TBS缓冲液组成:
       有许多可用于制作TBS缓冲区的方法,下表基于CSHL协议(标准)和BIOFOUNT公司,提供一些TBS缓冲液的方法
有两种不同的配方可用于制备具有相同Tris和NaCl浓度的TBS缓冲液:

方法1:

试剂 分子量 1x缓冲液摩尔浓度 10x缓冲液摩尔浓度 配置方法:10X 缓冲液 1L
NaCl 58.4 150 mM 1500 mM 88 g
Tris-HCl 157.6 ~15.2 mM ~152.2 mM 24 g
Tris base 121.1 ~4.62 mM ~46.2 mM 5.6 g

       缓冲液的pH值应接近7.6,请使用浓NaOH和HCl调节pH的情况下。


方法2

试剂 分子量 1x缓冲液摩尔浓度 10x缓冲液摩尔浓度 配置方法:10X 缓冲液 1L
Tris base 121.1 ~20 mM ~200 mM 24 g
NaCl 58.44 150 mM 1500 mM 88 g

      按照要求添加试剂后,可以使用HCl将PH值调节至7.6。


需要的试剂和材料清单:
  1. Tris碱和/或Tris HCl
  2. 氯化钠
  3. 盐酸
  4. ddH2O
材料仪器:
  1. pH计
  2. 磁力搅拌器和磁珠
  3. 玻璃烧杯
  4. 量筒


配置过程准备工作取决于选择了配置方法1还是方法2。

方法1允许您避免使用HCl,当您无法进入通风柜时,这可能很方便。
以下制备基于方法1(组成部分的表1),用于制备1L 10X TBS缓冲液。
  1. 称取24 g Tris-HCl,5.6 g Tris碱和88 g NaCl。
  2. 加入900毫升蒸馏水。
  3. 使用磁力搅拌器搅拌混合物直至盐溶解。
  4. 检查溶液的pH。
  5. 如有必要,使用浓盐酸和氢氧化钠调节pH。
  6. 对pH满意后,用蒸馏水补足至1L。
  7. 可以通过过滤或高压灭菌进行灭菌。通过0.22 µm过滤器将缓冲溶液过滤到无菌烧瓶中。

将10倍TBS稀释为1倍
在许多实验室中,通常的做法是根据需要制备储备溶液并进行稀释。
如果您有10倍的储备液,请将100毫升的储备液与900毫升的蒸馏水混合,以获得1升的1X TBS溶液。如果需要,调整1X的pH。
含Tween 20的Tris缓冲盐水(TBS-T)
第一次使用可能与Western blot的发明有关,Western blot的印迹是在Tris缓冲盐水中用NP 40作为清洁剂洗涤的。自此,TBS缓冲液成分几乎保持不变,但是大多数作者都用Tween 20代替了NP 40。
在大多数用法中,PBST可以代替TBST。最大的区别在于缓冲物质– PBST使用磷酸盐代替Tris。磷酸盐显示出对碱性磷酸酶偶联抗体的干扰,并利用磷酸特异性抗体()提高了背景信号。
       综上所述,TBS-T是Tween 20(0.05-0.1%)的TBS。对于弱结合抗体(GE),建议使用较低的吐温浓度。
 
TBS缓冲液存储:
     将溶液储存在室温或4oC下。根据来源,TBS缓冲区可以存储至少3个月至2年。
安全注意事项:
       TBS安全无毒,无需特殊处理。
TBS缓冲液
序号 产品名 货号 PH值  
1 TBS缓冲液 HC0766

HC0766 TBS缓冲液,0.02mol/L,pH8.2

 
2 TBS缓冲液 HC1581

HC1581 TBS缓冲液,0.05mol/L,pH7.4

 
3      

TBST缓冲液:
序号 产品名 货号 PH值  
1 TBST缓冲液 HC1973 

HC1973 Tween20/TBS溶液,1×TBST,pH7.4

 
2 TBST缓冲液 HC1995 

HC1995 Tween20/TBS溶液,1×TBST,pH7.5

 
3 TBST缓冲液 HC1609 

HC1609 Tween20/TBS溶液,10×TBST,pH7.4

 
4 TBST缓冲液 HC1202

HC1202 Tween20/TBS溶液,10×TBST,pH7.5

 
5 TBST缓冲液 HC1765 

HC1765 Tween20/TBS溶液,10×TBST,pH8.0

 
6 TBST缓冲液 HC1905

HC1905 Tween20/TBS溶液,20×TBST,pH7.4

 
7 TBST缓冲液 HC1843 

HC1843 Tween20/TBS溶液,20×TBST,pH7.5

 
8 TBST缓冲液 HC1943 

HC1943 Tween20/TBS溶液,20×TBST,pH8.0


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