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笔记：
1.选择两种不同IgG同种型的一抗。来自同一物种（例如小鼠 IgG1 和 IgG2a）或不同物种的不同亚组。确保您有匹配的二级荧光抗体。
2.决定覆盖每张载玻片需要多少微升。通常，每个组织阵列需要 300-600ul 的每种孵育溶液。
3.除微波步骤外，程序在室温下进行。

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染色程序
1. 更换二甲苯使载玻片脱蜡，每次更换孵育载玻片 10 分钟。
2.通过在两次更换 100% 乙醇、两次更换 95% 乙醇、一次更换 80% 乙醇、一次更换 70% 乙醇和两次更换蒸馏水中，将玻片浸入水中 20-30 次，使其水化。
3.将载玻片放入微波载玻片盘中（塑料最适合塑料载玻片架）并用 50mM TRIS/20mM EDTA pH 9.0 缓冲液覆盖（配方如下）。 （Kelli 在 van de Rijn 实验室中使用 EDTA pH8）
4.1架载玻片高功率微波3分钟，2架载玻片8分钟，3架载玻片13分钟。
5. 继续以 80% 功率微波加热 12 分钟。 （时间可能因微波炉而异，但重要的是确保载玻片至少快速沸腾 10 分钟并且不会变干。另外的缓冲液容器应与载玻片一起微波加热，以便重新填充载玻片盘。 )
6.冷却至少 30 分钟。冷却时间很关键。
7.用蒸馏水冲洗，X2。
8. 在 PBS 中冲洗 5 分钟。
9. 在同一试管中将两种选定的一抗在 PBS 中以正确的稀释度混合。 （例如，对于 1:50 的 400 µl CD3 和 1:50 的 CD20，混合 4ul CD3 + 4ul CD20 + 392µl PBS）。
10. 在室温下孵育 45 分钟。
11. 在 PBS 中清洗载玻片 15 分钟。
12.将在 PBS 中稀释的二抗混合在同一管中（抗物种为 1:100，抗链霉亲和素为 1:500。例如，对于 200 µl 抗物种：1 µl + 1 µl 荧光二抗 + 198 微升 PBS）。
13.在黑暗中孵育 45 分钟。
14. 在 PBS 中（在黑暗中）洗涤载玻片 15 分钟。
15.将载玻片安装在含有 DAPI 的荧光封固剂中（ProLong antifade reagent with DAPI, Invitrogen cat#P36935）
16.将幻灯片放入暗盒中。它们可以在室温下以这种方式储存 3-4 周。
17.在荧光显微镜上使用正确的激发和滤光片查看。

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解决方案：
50mM TRIS/20mM EDTA pH 9.0
12.1 g TRIS（可使用 Tris 或 Trizma）
1.48 克 EDTA 乙二胺四乙酸
用蒸馏水填充至 2 升。
调节至 pH 9.0

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替代安装介质
1.0ml Dako 荧光封固剂
0.1ul DAPI
在小管中加入，并通过缓慢倒置管非常温和地混合。