DNA纯化与RNA纯化有什么区别?
Release Time:2022-09-20DNA纯化和RNA纯化有什么区别?
了解 DNA 和 RNA 的具体作用是大多数分子生物学、基因组学、生物技术和流行病学研究中的一个重要因素。 但是,您需要高质量的 DNA 和 RNA 样本才能满足您的实验和后续下游应用的要求,因为使用受污染的样本无法为您提供准确的生物学相关结果。 这就是 DNA 和 RNA 纯化的用武之地。
那么,DNA纯化和RNA纯化的主要区别是什么?
DNA纯化
DNA 可以从各种材料中制备,包括血液、脱落的膀胱细胞、冷冻组织样本和石蜡组织块。由于 DNA 在合适的储存条件下通常是稳定的,因此可以分批制备和储存。
DNA 提取和纯化涉及三个基本步骤——打开细胞以暴露 DNA,通过使用适当的去污剂去除膜脂,以及用酒精沉淀 DNA。还有两个可选步骤几乎总是在沉淀步骤之前完成 - 通过添加适当的蛋白酶去除蛋白质和使用 RNase 去除 RNA。
通过样品的 DNA 纯化,您可以最大限度地减少非目标 DNA 和其他污染物的干扰,并提高样品在长期储存中的稳定性。
RNA纯化
另一方面,RNA 提取和纯化涉及四个基本步骤。首先,您需要通过向样品中加入硫氰酸胍和还原剂来破坏细胞,然后对其进行剧烈摇晃或涡旋。此步骤还将破坏二硫键并使样品中存在的污染蛋白质失活。
细胞裂解后,您需要添加苯酚和氯仿-异戊醇以从溶液中分离您的 RNA 样品。水相含有珍贵的 RNA,因此您需要将其放入单独的试管中,加入异丙醇并离心溶液以沉淀 RNA。然后用 75% 乙醇洗涤沉淀物,然后去除样品中的任何杂质。
然而,重要的是要注意 RNA 与 DNA 相比不太稳定,因此您应该只在使用前对其进行分离。在处理之前、期间和之后还应特别小心,以确保样品的纯度。请记住,即使是最少量的 RNase 也会影响其质量。
DNA 和 RNA 也可以通过提取总核酸部分并将其分成两部分从同一生物样品中分离出来——其中一部分将用 DNase 1 处理,而另一部分将用 RNase A 处理以回收 RNA 和DNA,分别。