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香豆素及香豆素衍生物探针
Release Time：2022-03-03香豆素类荧光探针介绍
香豆素和香豆素衍生物是紫外可激发的蓝色荧光染料，具有短发射波长，范围从 ∼390 到 ∼480 nm。 最广泛使用的香豆素包括 AMCA、7-氨基香豆素的衍生物（AFC 和 AMC）、7-羟基香豆素和 7-甲氧基香豆素，用于制备蓝色荧光肽、蛋白质和其他生物分子。 与荧光素、罗丹明和花青相比，香豆素由于其相对较低的消光系数而产生适度明亮且光稳定的荧光。
蓝色荧光探针最适用于细胞骨架标记等高丰度目标的直接成像、细胞追踪应用、作为检测酶活性的底物和某些多色荧光应用——包括免疫荧光、核酸和蛋白质微阵列、原位杂交 和神经元追踪。
香豆素类荧光探针光谱特性：
图 1. 常用香豆素衍生物 AMCA 的激发和发射光谱。
| 单元项目 | 值 |
| Ex/Em (nm): | 376/480 |
| Extinction Coefficient (ε): | 17,000 cm-1M-1 |
| Filter Set: | DAPI |
| Laser Line: | 405 nm laser |
| Quantum Yield (Φ): | 0.53 |
iFluor™ 350 - AMCA 和 Alexa Fluor® 350 的卓越替代品：
iFluor™ 350 染料是一种亮蓝色荧光染料，其光谱与 AMCA 相似，具有更高的水溶性、光稳定性和更高的荧光量子产率。 iFluor™ 350 偶联物非常适合对高丰度目标进行直接成像，尤其适用于多色应用，例如流式细胞术和超分辨率荧光显微镜，而且不会影响绿色和红色荧光探针的性能。
图 2. HeLa 细胞在 4% 甲醛中固定，然后用 Phalloidin iFluor™ 350 偶联物和 Nuclear Orange™ DCS1 染色。
| Fluorophore | Quantum Yield | Extinction Coefficient | Brightness |
| AMCA | 0.53 | 19,000 | x |
| iFluor™ 350 | 0.95 | 20,000 | xx |
香豆素染料产品：
BIOFOUNT提供广泛的香豆素产品选择，包括用于标记肽、蛋白质和其他生物分子的活性染料、偶联物、指示剂和用于检测细胞、匀浆和溶液中酶活性的底物。
香豆素活性染料:
反应性荧光香豆素和香豆素衍生物广泛用于共价标记生物分子，如抗体、碳水化合物、核酸、蛋白质、肽和寡核苷酸。 香豆素偶联物产生中等亮度和光稳定的蓝色荧光，通常用作检测酶活性的底物，或在与绿色、黄色或红色荧光探针结合时在多色荧光研究中提供对比。 香豆素和香豆素衍生物很容易在各种染料标记化学品中获得，包括：
※ 琥珀酰亚胺酯/NHS 酯 - 用于标记抗体、蛋白质、肽、胺修饰寡核苷酸和其他生物分子上的游离胺 (-NH2)
※ 马来酰亚胺 - 用于标记抗体、蛋白质和肽上的巯基
※ 叠氮化物 - 用于通过点击化学方法标记亚乙基
※ 炔烃 - 通过点击化学方法标记叠氮化物
※ 酰肼 - 用于标记醛和酮基团
※ 羧酸 - 用于在碳二亚胺预活化后标记胺或用于醇的 Steglich 酯化
※ 胺 - 用于标记各种亲电子化合物，例如活化酯
表 3. 活性香豆素和香豆素衍生物。
| 产品 | Chemical Reactivity | 活性基团 | Ex (nm) | Em (nm) | ε1 | 规格 | 货号 |
| Alpha Fluor™ 350 NHS ester | Amine | NHS Ester | 343 | 441 | 19000 | 1 mg | |
| AMCA alkyne | Azide | Alkyne | 346 | 434 | 19000 | 1 mg | |
| AMCA azide | Alkyne | Azide | 346 | 434 | 19000 | 1 mg | |
| AMCA C2 maleimide | Thiol | Maleimide | 346 | 434 | 19000 | 5 mg | |
| AMCA ethylenediamine | Aldehyde, Carboxylic Acid, Ketone | Ethylenediamine | 346 | 434 | 19000 | 5 mg | |
| AMCA, succinimidyl ester | Amine | Succinimidyl Ester | 346 | 434 | 19000 | 10 mg | |
| DEAC | Amine (after pre-activation with carbodiimides) | Carboxylic Acid | 411 | 472 | 40000 | 25 mg | |
| DEAC, succinimidyl ester | Amine | Succinimidyl Ester | 411 | 472 | 40000 | 25 mg | |
| 7-Hydroxy-4-methylcoumarin-3-acetic acid, succinimidyl ester | Amine | Succinimidyl Ester | 364 | 458 | 25000 | 25 mg | |
| 7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic acid | Amine (after pre-activation with carbodiimides) | Carboxylic Acid | 352 | 407 | 25000 | 25 mg | |
| 7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic acid | Amine (after pre-activation with carbodiimides) | Carboxylic Acid | 352 | 407 | 25000 | 250 mg | |
| 7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic acid, succinimidyl ester | Amine | Succinimidyl Ester | 352 | 407 | 35000 | 50 mg | |
| 7-Hydroxycoumarin-4-acetic acid, succinimidyl ester | Amine | Succinimidyl Ester | 360 | 450 | 18000 | 25 mg | |
| Alpha Fluor™ 350 C5 maleimide | Thiol | Maleimide | 343 | 441 | 19000 | 1 mg | |
| iFluor™ 350 amine | Aldehyde, Carboxylic Acid, Ketone | Amine | 345 | 450 | 19000 | 1 mg | |
| iFluor™ 350 hydrazide | Aldehyde, Carboxylic Acid, Ketone | Hydrazide | 345 | 450 | 20000 | 1 mg | |
| iFluor™ 350 maleimide | Thiol | Maleimide | 343 | 441 | 19000 | 1 mg | |
| iFluor™ 405 amine | Aldehyde, Carboxylic Acid, Ketone | Amine | 403 | 427 | 37000 | 1 mg | |
| iFluor™ 405 hydrazide | Aldehyde, Carboxylic Acid, Ketone | Hydrazide | 403 | 427 | 37000 | 1 mg | |
| iFluor™ 405 maleimide | Thiol | Maleimide | 403 | 427 | 37000 | 1 mg | |
| MCA succinimidyl ester | Amine | Succinimidyl Ester | 322 | 381 | 15000 | 25 mg | |
| 7-Methoxycoumarin-3-carboxylic acid | Amine (after pre-activation with carbodiimides) | Carboxylic Acid | 355 | 405 | 20000 | 1 g | |
| 7-Methoxycoumarin-3-carboxylic acid | Amine (after pre-activation with carbodiimides) | Carboxylic Acid | 355 | 405 | 20000 | 5 g | |
| 7-Methoxycoumarin-3-carboxylic acid, succinimidyl ester | Amine | Succinimidyl Ester | 355 | 405 | 25000 | 100 mg | |
| iFluor™ 350 succinimidyl ester | Amine | Succinimidyl Ester | 345 | 450 | 20000 | 1 mg | |
| iFluor™ 405 succinimidyl ester | Amine | Succinimidyl Ester | 403 | 427 | 37000 | 1 mg |
