铅离子/镉离子探针

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Leadmium Green dye
Leadmium Green AM 染料作为铅或铅的特定指示剂细胞中的镉。 细胞加载染料后，非特异性酯酶裂解乙酰氧基甲基 (AM) 基团，产生带电形式的 Leadmium Green 染料泄漏细胞比母体化合物慢得多。 对钙不敏感的 Leadmium™ Green 染料在存在纳摩尔水平的铅和微摩尔水平的铅镉。 这种染料可用于显微镜和流式细胞仪应用。

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Leadmium green AM dye产品特点：
※ 用于细胞内铅和镉含量测量的高度特异性指示剂
※ 灵活的形式允许用于多种检测方式—流式细胞分析、荧光显微镜成像以及微孔板读数仪
※ 明亮的荧光和对钙的高分辨力，可检测出纳摩尔水平的铅和微摩尔水平的镉
※ 采用 488 nm 激光线轻松激发
※  Leadmium 绿色 AM 染料易于加载，在酯酶切割乙酰氧基甲基基团后能很好地保留在细胞内

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实验前试剂准备
1.需要准备但未提供的材料
※ PbCl2 溶液
※ CdCl2 溶液
※ 四-（2-吡啶基甲基）乙二胺（TPEN)
※ 乙醇
※ 离子霉素钙盐
※ 死细胞染色剂，例如碘化丙啶（1.0 mg/mL 水溶液）； SYTOX® Red 死细胞染料用于 633 或 635 nm 激发（5 µM 溶液在二甲基亚砜中）； 或用于流式细胞术的 SYTOX® Blue 死细胞染料（1 mM DMSO 溶液）
3.试剂准备
3.1 从冰箱内取出一管Leadmium™ Green AM dye（50 µg），让其回温到室温，避光保存。
3.2 往管子内加入50µl 高质量无水的DMSO（Cat#：MS4601-100mL），避光混匀，使其充分溶解。
3.3 用生理盐水按照1：10的比例将Leadmium™ Green AM dye的DMSO储存液稀释成工作液（比如取20µl 储存液加到180µl生理盐水，混匀），所有溶液制备过程一直避光。
3.4 37℃温育生理盐水，用于后续多个步骤的清洗过程。
3.5 【可选】如果此实验需要设置相对对照（用已经浓度的PbCl2处理细胞），建议PbCl2的起始浓度范围是1nM-625nM。制备625nM PbCl2【添加250µl 10µM PbCl2到3.75ml生理盐水。然后做9次连续性梯度稀释最终得到1nM PbCl2】。37℃保存这些溶液直到需要。每个浓度需要1ml量。
3.6 【可选】如果此实验需要设置相对对照（用已经浓度的CdCl2处理细胞），建议CdCl2的起始浓度范围是1µM-250µM。制备250µM CdCl2【添加1ml 1mM CdCl2到3ml生理盐水。然后做8次连续性梯度稀释最终得到1µM CdCl2】。37℃保存这些溶液直到需要。每个浓度需要1ml量。
3.7 【可选】制备10mM TPEN工作液，通过添加1.2ml无水乙醇到5mg TPEN。混匀，室温保存。

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Figure 1. Background fluorescence of Leadmium™ Green dye in the Jurkat cell line. Cells in saline were loaded with Leadmium™ Green AM dye and washed. The singlecolor fluorescence was collected using 488 nm excitation and a 525/10 nm bandpass filter. Because no intracellular lead or cadmium was present in the cells, this histogram indicates the background fluorescence contributed by Leadmium™ Green dye.

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Figure 2. Fluorescence of Jurkat cells containing PbCl2 in the Jurkat cell line. Cells in saline were loaded with Leadmium™ Green AM dye and washed and then incubated in the presence of 1 µM PbCl2 in saline and 1 µM ionomycin. The single-color fluorescence was collected using 488 nm excitation and a 525/10 nm bandpass filter. The histogram shows cells positive for intracellular lead.

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