ActinRed 555（细胞骨架红色荧光探针）

ActinRed 555 Probes 实验准备材料：
1. （可选）甲醇
2. 1×PBS 缓冲液, pH 7.4, 细胞培养级别（货号：HC0016）
3. 固定液 4%多聚甲醛（溶于 PBS 缓冲液）
4. 丙酮或透化液 0.5% Triton X-100（溶于 PBS 缓冲液）
5. Fluoromount-GTM   水溶性封片剂（不含 DAPI），DAPI（货号：SC0382）
6. 可选）DAPI Fluoromount-GTM  水溶性封片剂（含 DAPI）
7. （可选）BSA，标准级别（货号：SS2164）
8. 载玻片和盖玻片
9. 盖玻片周围密封液（如透明指甲油）
10. 组装有 TRITC 激发/发射滤片，以及 DAPI 激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜。

1. ActinRed 555 Probes（300T）
本品以溶于甲醇的 20µM 储存液形式提供，总量为 300µL。按照 100 nM 的工作液浓度来换算，可制备总量为 60 mL 的工 作液。建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，-20℃避光冻存，一年稳定。
开始实验前，使用 1×PBS 缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为：80~200nM。工作液现配现用。

2. ActinRed 555 Probes（1mg）

本品以冻干粉形式提供，分子量为 1231.4，总量为 1mg。可先用甲醇或者 DMSO 充分溶解配制成 20~100µM 的储存液。 如，加入 8.1208mL 甲醇到 1mg 该品即得到 100µM 等量的储存液，根据单次使用量，进行小量分装，-20℃避光冻 存，一年稳定。
开始实验前，使用 1×PBS 缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为：80~200nM。工作液现配现用

ActinRed 555 ReadyProbes 染色方法：
注意：对于某些特定的实验体系，我们提供的染色方案可能需要优化。但在大多数情况下，按照本操作说明可取得一致的结果。
以下方法以细胞爬片的染色步骤为例：
1. 用 PBS（pH7.4）轻轻洗涤细胞爬片。
2. 用 3.7%的多聚甲醛（PBS 配制）室温固定细胞，时间为 10 分钟。
注意：甲醇在固定过程中可能会破坏细胞肌动蛋白，因此**避免任何含甲醇的固定剂。首选的固定剂是不含甲醇的多聚甲醛溶液。
3. 用 PBS 清洗细胞样品两遍或以上。
4. 将细胞爬片至于干净的玻璃培养皿中，用含 0.1% Triton X-100 的 PBS 缓冲液室温透化样本，处理时间 3-5 分钟。（也可使用丙酮溶液透化处理，但需至于-20℃）
5. 用 PBS 清洗细胞样品两遍或以上。
6. 用含 1% BSA 的 PBS 封闭细胞，时间为 20-30 分钟。
7. 向细胞爬片上滴加两滴 ActinRed 555 Probes，室温避光孵育 30 分钟。为避免染料蒸发，请将爬片置于密闭的湿盒中。
8. 用 PBS 清洗细胞样品两遍或以上。
9. 如需长期保存，请将细胞样品至于空气中自然晾干，并用封片剂封片。储存于 2-6℃避光环境下的样品正常可至少保存半年。