营养琼脂 NA

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一、营养琼脂 NA 实验操作方法
1. 培养基配制
称量营养琼脂干粉，加入纯化水，搅拌混匀（按说明书，通常 28g/L）
加热煮沸，充分溶解干粉
分装三角烧瓶，121 ℃高压蒸汽灭菌 15 min
不要长时间高温灭菌，避免营养破坏
2. 倒平板操作
灭菌后培养基水浴冷却至 45～50℃（手感温热，不烫手）
无菌环境下吸取培养基，倾注无菌平皿，每皿约 15～20 mL
水平静置，待自然凝固备用
若当天不用：平板密封倒置，4℃保存，一周内用完。
3. 菌落总数检测典型流程
样品梯度稀释（无菌生理盐水梯度稀释）
取 1 mL 稀释液加入无菌平皿
立即倾注冷却后的 NA 培养基，轻轻转动平皿混匀样品
凝固后倒置培养
食品常规：36℃±1℃，培养 48±2 h
水环境部分菌种：可 28℃培养
培养结束计数适宜平板（30～300 菌落），计算样品总菌落数
4. 菌种划线纯化操作
接种环灼烧灭菌，冷却后蘸取菌液
四区划线法涂布于营养琼脂表面
36℃倒置培养 18～24 h，获得单菌落
 

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二、营养琼脂NA应用
※ 食品、饮用水、环境表面 菌落总数测定（GB4789.2 国标首选）
※ 纯化菌种、四区划线分离单菌落
※ 观察细菌标准菌落形态、大小、色泽、溶血、边缘特征
※ 菌种传代、短期 4℃保存普通细菌
※ 细菌纯化、复苏冻干菌种、斜面菌种制备
※ 消毒剂效果测试、微生物污染监控
※ 空气沉降菌、表面擦拭微生物检测

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三、营养琼脂NA作用原理
蛋白胨与牛肉浸粉提供广谱营养，不添加抑制剂，几乎支持所有营养要求不高的异养细菌生长；无选择性，细菌均可生长，因此用来统计样品中全部需氧、兼性厌氧细菌总数。
不含胆盐、染料等抑菌物质，真菌也可微弱生长（霉菌生长缓慢）

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四、营养琼脂NA成份：
※ 蛋白胨 10.0 g：提供氨基酸、氮源、碳源，细菌主要营养
※ 牛肉浸粉 3.0 g：维生素、无机盐、生长因子，促进普通细菌繁殖
※ 氯化钠 5.0 g：维持细胞渗透压
※ 琼脂 15.0 g：凝固剂，形成固体培养基
※ 纯化水 1000 mL
※ pH：7.2～7.4

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五、营养琼脂NA 常见问题
平板出现大量水汽：冷却温度过高，冷凝水滴落造成菌落蔓延
细菌不长：培养基 pH 偏离、灭菌过度破坏营养、培养温度错误
平板无法凝固：琼脂降解、干粉失效
菌落成片蔓延：稀释倍数不够，样品浓度过高

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六、实验注意事项：
1.实验前需戴好防护眼镜，穿戴防护服和口罩，佩戴手套，避免与皮肤接触。
2.实验过程中如遇到有毒或者刺激性物质及有害物质产生，必要时实验操作需要手套箱内完成以免对实验人员造成伤害。
3.取样品的移液枪头需及时更换，必要时为避免交叉污染尽可能选择滤芯吸头。
4.称量药品时选用称量纸，并无风处取药和称量以免扬撒，试剂的容器使用前务必确保干净，并消毒。
5.取药品时尽量采用多个药勺分别使用，使用后清洗干净。
6.实验后产生的废弃物需分类存储，并交于专业生物废气物处理公司处理，以免造成环境污染。
大规格定制：定制产品请将信息发送至sales@bio-fount.com。
Experimental considerations:
1. Wear protective glasses, protective clothing and masks, gloves, and avoid contact with the skin during the experiment.
2. The waste generated after the experiment needs to be stored separately, and handed over to a professional biological waste gas treatment company to avoid environmental pollution.