Trizol(总RNA提取试剂)

产品详细介绍：
Trizol(总RNA提取试剂):Trizol是一种新型的用于细胞或组织的总RNA提取试剂，BIOFOUNT Trizol采用与Invitrogen TRIzol相似的原理和方法，其颜色、抽提的方法和步骤与后者完全相同。BIOFOUNT Trizol含酚和异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶，保持RNA的完整性。加入氯仿并离心后，溶液形成上清层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上清层用异丙醇沉淀回收总RNA，中间层用乙醇沉淀回收DNA，下层用异丙醇沉淀回收蛋白。
实验过程中需要准备的材料：、试剂：无水乙醇、氯仿、异丙醇、DEPC处理水等。2、耗材： RNase广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中，RNase是导致RNA降解的主要物质，非常稳定。操作时应佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料制品、玻璃和金属物品、实验仪器等应清除RNase，移液器吸头、EP管等制品的RNase free处理尤为重要。3、仪器：低温高速离心机、低温冰箱。 实验过程中的操作步骤(仅供参考)： 样品准备 ⑴贴壁细胞： ①直接裂解：直接在培养瓶/皿中加入Trizol裂解细胞，每0cm2面积加ml Trizol，用移液器吹打混匀。 ②胰蛋白酶消化：用无菌PBS洗涤细胞后，加入含有0.05～0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基终止反应，将细胞溶液转移至无RNase的离心管中，5000～6000g离心5 min，收集细胞沉淀，去除上清。收集细胞时一 定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不完全，降低RNA收获率。 ⑵悬浮细胞：无需清洗细胞，直接5000～6000 g离心5 min，收集细胞。每5×06～07动物、植物和酵母细胞或每07细菌细胞加入ml Trizol。 ⑶组织：取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织，50～00mg组织在液氮中充分研磨或者加入ml Trizol研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过Trizol体积的0%。研磨要迅速，以min为佳。 ⑷血液：取0.5～ ml新鲜或冻存的血液，2000g离心5 min，去除血浆，加入ml Trizol，充分振荡混匀。 核酸分离：充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存5～0 min后，充分振荡，反复～3次)，将裂解样品或匀浆液室温放置5～0 min，使核蛋白与核酸完全分离。 样品分层：加入0.2 ml氯仿/ml Trizol，剧烈振荡5 s，室温放置2～3 min。置于4℃离心机，2000 g离心0～5 min。上层为水相，中间层和下层为有机相，RNA在上层水相。 沉淀RNA：吸取上层水相(约500μl)转移至无RNase的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA污染)，加入等体积异丙醇混匀(或者加入.2倍体积BIOFOUNT Trizol专用RNA沉淀液，超低温冰箱放置2～3hr,可以大大提高RNA回收率），室温放置5～20 min。2000 g 4℃离心0 min，离心后管侧或管底形成胶状沉淀，弃上清。 洗涤RNA：加入ml DEPC水配制的75%乙醇/ml Trizol洗涤沉淀(或者加入ml BIOFOUNT Trizol专用RNA洗涤液，可以大大提高RNA纯度），室温放置5～0 min，7500g 4℃离心5 min，弃上清。室温干燥5～0 min，不宜过分干燥，否则RNA难以溶解。 溶解RNA：加入30～50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA，-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中RNase含量高的样品，沉淀时用0 0%去离子甲酰胺溶解。 分析与定量： 测定样品在260 nm和280 nm的吸收值确定RNA的质量。按OD=40pg RNA计算RNA的产率。OD260/280在.8～2.0视为抽提RNA纯度较好。浓度在4μg/ml以上的样品适于用分光光度计测定。 进行甲醛变性琼脂糖电泳，确定RNA的完整性和污染情况。 核酸分析仪测定RNA的质量和纯度。 实验过程中注意事项： 、 样品保存：加入Trizol混匀后，样品可在-70℃放置～2月；RNA样品可以在70%酒精中-70℃保存2～4周：如果需要长期保存，应置于超低温冰箱中保存。 2、 Trizol是强腐蚀性物质，污染皮肤或眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。 3、 Trizol可常温运输，建议保存4℃保存。 4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：2个月有效。