线粒体绿色荧光探针

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线粒体绿色荧光探针(MitoTracker Green FM)；
分子式：C34H28Cl5N3O
分子量：671.8797
简介：MitoTracker Green FM 是线粒体绿色荧光染料，该染料在线粒体中的定位并不受线粒体膜电位的影响。该染料可以染活细胞，但是在醛类固定剂固定之后，会导致荧光信号丢失。
外观：粉末
溶解性：溶于DMSO
激发波长（Ex）490
发射波长（Em）516
MitoTracker Green FM是一种细胞渗透型的carbocyanine结构衍生物，包含标记线粒体的弱巯基反应性的氯甲基官能团。本品是一种亮绿色荧光探针（（Ex=490 nm，Em=516 nm）），其在水溶液中几乎不发荧光，只有当聚集在线粒体的脂质环境才能发荧光，背景荧光几乎可忽略。使得操作步骤极其简单，只需用探针孵育细胞，即可被动运输穿过细胞膜并直接聚集在活性线粒体上，可不经过清洗直接观察。与MitoTracker® Red CMXRos不同的是本品定位于线粒体的能力不受线粒体膜电位影响，使其可能作为定量线粒体质量的一种工具。本品经乙醛固定后染料不稳定，因此更适合活细胞染色。
虽然传统的线粒体荧光探针如TMR和罗丹明123，也能很容易的聚集在功能线粒体上，但是一旦线粒体膜电位丧失即会被洗掉，从而在一些需要细胞进行醛类固定或者包含线粒体能量状态影响因子的实验中，使其应用大受限制。
运输和保存方法
2~8℃运输
-20℃避光干燥保存。

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MitoMark Green I 在 HeLa 细胞中的应用
MitoMark Green I 在 HBSS 中稀释并以 200 nM 的浓度应用于活 HeLa 细胞。 HeLa 细胞在 37°C 下孵育 30 分钟。 孵育完成后，将 MitoMark Green I 稀释液洗掉，并将新鲜的 HBSS 应用于细胞。 细胞未固定，因为 MitoMark Green I 染色在固定后不能很好地保留（光漂白剂）。 活细胞染色最适合 MitoMark Green I。

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线粒体绿色荧光探针(MitoTracker Green FM)使用方法
1、储存液的配制
本品是以粉末形式提供，使用前需将本品回温至室温。
之后使用细胞培养级别的无水DMSO将其充分溶解至终浓度1 mM。
本品M. Wt.= 671.88 g/mol，换算下来，50 µg粉末只需加入74.4µL DMSO即可得到1 mM储存液。
可根据单次的使用量将储存液分装后放到-20℃避光，避免反复冻融。
2、工作液的配制
根据不同的实验目的使用不同的探针浓度，以下的起始操作条件仅作参考，可根据细胞类型和其他的相关因素如细胞或组织的透化等进行适当调整。
用适当的缓冲液或者细胞培养基稀释1 mM储存液至工作液浓度。本探针MitoTracker® Green FM的推荐浓度为20-200 nM，浓度过高可能对其他细胞结构进行染色。
3、染色及检测
1）贴壁细胞的染色
培养皿/板内加入适量的培养基覆盖盖玻片进行爬片培养。当细胞长至所需丰度，吸除培养液，加入37℃预热的MitoTracker® Green FM染色工作液。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45 min（最佳孵育时间需优化）。染色结束后，使用新鲜培养液或缓冲液替换上述染色液，即可将其置于荧光显微镜下观察或荧光酶标仪下读数。
2）悬浮细胞的染色
离心收集细胞，吸除上清，利用37℃预热的MitoTracker Green FM染色工作液轻轻重悬细胞。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45 min（最佳孵育时间需优化）。染色结束后，离心收集细胞，利用37℃预热的新鲜培养液或缓冲液重悬细胞，被染色的细胞可用流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜进行分析。
注意事项
1）DMSO有毒，使用时请小心操作。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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