Tris缓冲液在蛋白质电泳和蛋白质印迹中的用途：
Tris缓冲液是蛋白质电泳和蛋白质印迹必不可少的。大多数SDS-PAGE凝胶，电泳缓冲液和印迹缓冲液均用Tris缓冲。所有常见的缓冲液都可以预混合，或者，如果您更喜欢自己制作Tris缓冲液，则可以从纯化的Tris粉末，甘氨酸和其他分子生物学级缓冲液试剂开始。

大多数SDS凝胶使用不连续的Tris缓冲液系统。堆积凝胶通常具有pH 6.7-6.8的特性，该凝胶具有大的孔，以便较大的肽可以轻松迁移。在此pH值下，电离的氯离子迅速迁移，从而提高了它们背后的pH值，并在电导率低的区域产生了电压梯度，这导致甘氨酸（来自运行缓冲液）离子化并迁移到氯离子的后部。样品中的大多数肽由于结合了SDS而带负电荷，它们在氯化物和甘氨酸之间迁移，形成一条窄带，因此变成“堆积”的。

一旦堆叠到达pH较高（通常为pH 8.7-8.8）的分离凝胶，甘氨酸离子化的增加会导致其加速并超过肽段。另外，较小的分辨凝胶孔径开始具有筛分作用，导致按大小分离肽。

大多数蛋白质印迹方案使用离子强度低的Tris缓冲液进行蛋白质转移。转移时间取决于印迹设备的类型和感兴趣的肽大小范围。

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Tris缓冲液在核酸琼脂糖电泳中的应用
Tris缓冲液广泛用于DNA琼脂糖电泳。两个主要缓冲液是TBE（Tris硼酸盐/ EDTA）和TAE（Tris乙酸盐/ EDTA）。尽管在电泳过程中不同形式的DNA的分辨率及其迁移率存在一些差异，但这些Tris缓冲液通常可以互换使用。 TBE中的硼酸根离子会抑制许多酶，因此在电泳后不进行某种类型的DNA纯化，某些酶介导的下游操作可能无法起作用。因此，TAE缓冲液在大多数DNA实验室中都非常适合日常使用。
 

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配制Tris缓冲液
Tris缓冲液对于大多数生物系统都是不错的选择，因为它在25°C时的pKa约为8.1，使其成为pH值为7–9的有效缓冲剂。此pH范围适用于大多数生物过程。与更专业的缓冲液（例如HEPES）相比，Tris粉还便宜且坚固。

有两种制作Tris缓冲区解决方案的方法。一种是制备均处于所需浓度的Tris碱和Tris HCl溶液，然后将一种溶液（通常是Tris HCl）的等分试样添加到另一种溶液（通常是Tris碱）中，同时监控pH值直至获得正确的pH值。实际上，很少这样做。

制作大多数常用的Tris缓冲液的常用方法是仅从Tris基数开始。将适量的Tris粉末溶于水，用HCl调节pH值，然后将缓冲液补足至所需体积。假设在调节pH值时没有过冲，则该方法不会改变离子强度。但是，在过冲并用NaOH或用Tris HCl重新调节并用NaOH调节pH后，离子强度会发生变化。根据Tris缓冲区的预期用途，这种更改可能重要也可能不重要。
 

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配置Tris缓冲液注意事项：
制作Tris缓冲液时，重要的是在调节pH值时使用Tris兼容电极。当与Tris缓冲液一起使用时，单结Ag / AgCl电极可能表现出不稳定性，因为银会逐渐沉淀并堵塞电极。使用双结或甘汞参比电极可确保在Tris缓冲液中进行准确的pH测量。