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DNA提取方法介绍
Release Time：2020-11-28DNA提取的主要方法介绍：
DNA实验室过程中常用 DNA提取方法主要有：Chelex100法、有机法提取DNA、磁珠法提取DNA、盐析法提取DNA、NaOH法提取DNA等，详细如下文：
1、Chelex100法提取DNA
ChelexDNA100提取原理 ：Chelex100是一种 螯合树脂 ，由苯乙烯 、二乙烯苯 共聚 体组成 ，含有 成对 的亚氨基二乙酸盐离子 ，起着螯合基团作用 ，对多价金属离子有极强亲和力 。
在低离子强度 、碱性 及100 ℃煮沸 条件 下，可以 使细胞膜裂解 ，并使与DNA结合 的蛋白质变性 ，DNA游离 。
检材基质 中一般 含有 大量 金属离子，在低离子强度 及加热 条件 下，金属离子可以 辅助 脱氧核糖核酸 酶降解 DNA，也可以 抑制 PCR反应 ，所以 在提取 DNA时，加入 Chelex100，螯合了金属离子，是为了防止DNA降解 ，h提高PCR扩增成功率 。
方法 ：剪取适量 血斑 、精斑 、汗斑 、鼻涕 斑、指甲 、毛根 、软组织 等等 生物 检材，置于 0. 5ml 离心管 内，加入适量 纯水 ，室温 浸泡 ，13 ,00 0rpm 离心 5min，上清 丢弃 ，管底 留约20 μl左右 液体 及检材基质 ，加入 100 -200 μl5 %Chelex100(有时 需加 适量 PK )56 ℃15 min 至数10 小时 不等 ，100 ℃8m in ，13 ,00 0rpm 离心 5mim，上清 备用 。
2.有机法提取DNA
有机法提取DNA原理:采用有机方法 提取 DNA一般用 平衡酚(实验也常称为饱和酚)、氯仿 等按比例混合 ，用不同 的方法 提取 DNA。
DNA易溶 于水 ，不溶于 有机溶剂 ，蛋白 分子 表面 具有 亲水性 基因 ，易于 水合作用，表面 形成 水化 层，使蛋白 分子 顺利 进入 水溶液 ，形成 稳定 的胶体溶液 。
在有机溶剂 存时，破坏 了蛋白质 胶体溶液 的稳定性 ，使蛋白质变性 沉淀 ，离心 后，有机溶剂 在试管 底层 (有机相)，DNA继续 稳定 存在 于上层 水相，蛋白质 沉淀 存在 于两相之间 。
水相中 的DNA存在 大量 冷无水乙醇 和单价 阳离子 时，水溶于乙醇 ，DNA从水相中 析出 ，沉淀 ，离心回收.
3.磁珠法提取DNA
磁珠法提取DNA原理 ：(异)硫氰酸胍(GuSCN)是强烈 蛋白变性剂 ，不破坏 蛋白质 一级结构，能破坏 细胞膜 及核膜蛋白 ，并使核酸酶 失活 ，释放 DN A。
磁珠 可以 特异性 吸附 DN A，与DNA结构及片段 大小 无关 。
通过 洗涤液 洗涤 ，在仅留有 特异 吸附 DN A的磁珠 中加入 洗脱 液，65 ℃解离 后，DN A释放 于洗脱 液中。
方法 ：5%Chelex100提取 DNA上清液或者 用裂解 液直接 提取 骨骼 、指甲 、毛发 DN A上清液等约移于0.5ml离心管 内→加入 结合 液10 0u l，磁珠 5u l→振荡 混匀 ，室温 5min→在磁架上 吸弃上清 →加入 洗涤液 I30 0u l→振荡 混匀 →在磁架上 吸弃上清 →加入 洗涤液 II 30 0u l→振荡 混匀 →在磁架上 吸弃上清 →加入 洗涤液 II 30 0u l→室温 放置 2min干燥 →加入 30 -50 μl洗脱 液，振荡 混匀 →65 ℃10min→速于磁架上 吸上清 于另一新 离心管 内，备用 。
4.盐析法提取DNA
盐析法提取DNA介绍：1988年 Miller等报导 经典 盐析 法提取 血液 DN A，其方法 为溶解 红细胞 后，离心 沉渣 用PK 消化 ，用大约 6M 饱和 NaCl沉淀 蛋白质 ，离心 上清 中DN A用无水乙醇沉淀 ，用TE溶解 。
5.NaOH法提取DNA
NaoH提取DNA原理 ：强碱 溶解 、变性 蛋白质 ，破坏 细胞膜 及核膜 ，变性 核酸酶 ，释放 DN A，NaOH不破坏 DN A一级结构 。
NaoH提取方法 ：
1、试剂 配制 裂解 buffer0 .2MNaOH中和 buffer0 .04 MTris-HC LpH7.52 、实验步骤5μl或1×1mm 血斑 →加入 450 μl纯水 →室温 或37 ℃15 -30min→13 ,00 0rpm 5min→弃上清 →沉淀 中加入 20 μl0 .2MNaOH（全血 室温 5min血斑 75 ℃5min）→加入 180 μl0 .04 MTris-HC LpH7.5 →振荡 混匀 ，离心 上清 备用 。
DNA实验室过程中常用 DNA提取方法主要有：Chelex100法、有机法提取DNA、磁珠法提取DNA、盐析法提取DNA、NaOH法提取DNA等，详细如下文：
1、Chelex100法提取DNA
ChelexDNA100提取原理 ：Chelex100是一种 螯合树脂 ，由苯乙烯 、二乙烯苯 共聚 体组成 ，含有 成对 的亚氨基二乙酸盐离子 ，起着螯合基团作用 ，对多价金属离子有极强亲和力 。
在低离子强度 、碱性 及100 ℃煮沸 条件 下，可以 使细胞膜裂解 ，并使与DNA结合 的蛋白质变性 ，DNA游离 。
检材基质 中一般 含有 大量 金属离子，在低离子强度 及加热 条件 下，金属离子可以 辅助 脱氧核糖核酸 酶降解 DNA，也可以 抑制 PCR反应 ，所以 在提取 DNA时，加入 Chelex100，螯合了金属离子，是为了防止DNA降解 ，h提高PCR扩增成功率 。
方法 ：剪取适量 血斑 、精斑 、汗斑 、鼻涕 斑、指甲 、毛根 、软组织 等等 生物 检材，置于 0. 5ml 离心管 内，加入适量 纯水 ，室温 浸泡 ，13 ,00 0rpm 离心 5min，上清 丢弃 ，管底 留约20 μl左右 液体 及检材基质 ，加入 100 -200 μl5 %Chelex100(有时 需加 适量 PK )56 ℃15 min 至数10 小时 不等 ，100 ℃8m in ，13 ,00 0rpm 离心 5mim，上清 备用 。
2.有机法提取DNA
有机法提取DNA原理:采用有机方法 提取 DNA一般用 平衡酚(实验也常称为饱和酚)、氯仿 等按比例混合 ，用不同 的方法 提取 DNA。
DNA易溶 于水 ，不溶于 有机溶剂 ，蛋白 分子 表面 具有 亲水性 基因 ，易于 水合作用，表面 形成 水化 层，使蛋白 分子 顺利 进入 水溶液 ，形成 稳定 的胶体溶液 。
在有机溶剂 存时，破坏 了蛋白质 胶体溶液 的稳定性 ，使蛋白质变性 沉淀 ，离心 后，有机溶剂 在试管 底层 (有机相)，DNA继续 稳定 存在 于上层 水相，蛋白质 沉淀 存在 于两相之间 。
水相中 的DNA存在 大量 冷无水乙醇 和单价 阳离子 时，水溶于乙醇 ，DNA从水相中 析出 ，沉淀 ，离心回收.
3.磁珠法提取DNA
磁珠法提取DNA原理 ：(异)硫氰酸胍(GuSCN)是强烈 蛋白变性剂 ，不破坏 蛋白质 一级结构，能破坏 细胞膜 及核膜蛋白 ，并使核酸酶 失活 ，释放 DN A。
磁珠 可以 特异性 吸附 DN A，与DNA结构及片段 大小 无关 。
通过 洗涤液 洗涤 ，在仅留有 特异 吸附 DN A的磁珠 中加入 洗脱 液，65 ℃解离 后，DN A释放 于洗脱 液中。
方法 ：5%Chelex100提取 DNA上清液或者 用裂解 液直接 提取 骨骼 、指甲 、毛发 DN A上清液等约移于0.5ml离心管 内→加入 结合 液10 0u l，磁珠 5u l→振荡 混匀 ，室温 5min→在磁架上 吸弃上清 →加入 洗涤液 I30 0u l→振荡 混匀 →在磁架上 吸弃上清 →加入 洗涤液 II 30 0u l→振荡 混匀 →在磁架上 吸弃上清 →加入 洗涤液 II 30 0u l→室温 放置 2min干燥 →加入 30 -50 μl洗脱 液，振荡 混匀 →65 ℃10min→速于磁架上 吸上清 于另一新 离心管 内，备用 。
4.盐析法提取DNA
盐析法提取DNA介绍：1988年 Miller等报导 经典 盐析 法提取 血液 DN A，其方法 为溶解 红细胞 后，离心 沉渣 用PK 消化 ，用大约 6M 饱和 NaCl沉淀 蛋白质 ，离心 上清 中DN A用无水乙醇沉淀 ，用TE溶解 。
5.NaOH法提取DNA
NaoH提取DNA原理 ：强碱 溶解 、变性 蛋白质 ，破坏 细胞膜 及核膜 ，变性 核酸酶 ，释放 DN A，NaOH不破坏 DN A一级结构 。
NaoH提取方法 ：
1、试剂 配制 裂解 buffer0 .2MNaOH中和 buffer0 .04 MTris-HC LpH7.52 、实验步骤5μl或1×1mm 血斑 →加入 450 μl纯水 →室温 或37 ℃15 -30min→13 ,00 0rpm 5min→弃上清 →沉淀 中加入 20 μl0 .2MNaOH（全血 室温 5min血斑 75 ℃5min）→加入 180 μl0 .04 MTris-HC LpH7.5 →振荡 混匀 ，离心 上清 备用 。
