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细菌生化检验实验 （实验介绍,实验试剂,实验步骤,实验结果的判断）
Release Time：2020-08-13一、细菌生化检验实验介绍
石蕊既是pH指示剂又是氧化还原指示剂。在酸性溶液（pH 4.5）中为红色，在碱性溶液（pH 8.3）中为蓝色。介质的自然色应为紫蓝色（pH 6.8）。石蕊可以被某些细菌还原为无色基质。
牛奶含有乳糖和三种主要蛋白质，即酪蛋白，牛奶蛋白质和乳球蛋白。
牛奶凝结主要是由含有凝乳酶的细菌引起的，凝乳酶可将酪蛋白转化为酪蛋白，或由于乳糖发酵产生大量酸而导致酪蛋白沉淀。
一些细菌产生脂肪酶，脂肪酶可以分解牛奶中的脂肪，形成黄色透明液体。
一些细菌具有酪蛋白水解酶，可以催化酪蛋白水解，最终将其转化为透明的液体酪蛋白沉淀。此过程称为肽化。
二、细菌生化检验实验试剂
以上是实验采用的试剂，请采用高品质的范德生物的生化试剂。
脱脂奶粉100.0克，石蕊属，水1000.0 mL
三、细菌生化检验实验步骤
将奶粉完全溶解在水中，调节至pH 6.8，添加石蕊溶液，直到其呈现紫蓝色（pH 6.8），分成试管，每管约5 mL。在115°C下灭菌10分钟，迅速冷却，然后放入冰箱中以备后用。
石蕊溶液的制备方法：称取2.5 g石蕊，在碗中研磨，转移到装有40％乙醇水溶液的50 mL烧瓶中，煮沸1分钟，静置约10分钟，吸取上清液并将其转移到另一个在烧瓶中，向原始烧瓶中加入50 mL 40％的乙醇水溶液，煮沸1分钟。
将上清液添加到之前的上清液中，将两种上清液均匀混合，离心沉淀，将上清液倒入100 mL量筒中，用40％乙醇补足100 mL，并逐滴加入1 M盐酸直至溶液呈紫色，这是2.5％的石蕊溶液。
95％乙醇42.1 mL加水至100 mL是40％乙醇溶液。
3.测试方法
接种受试细菌的18-24小时培养物。如果是厌氧菌，则在培养基试管中加入无菌铁屑或指甲，并盖上无菌凡士林，然后在36±1℃下培养。 -14天。
四、细菌生化检验实验结果的判断
1.粉红色：将乳糖发酵产生酸；
2.紫色蓝色：乳糖经过发酵并保持其原始颜色；
3.蓝色：碱性反应，乳糖发酵，细菌分解培养基中的含氮物质产生碱性物质；
4.白色：石蕊恢复了；
5.澄清：消化乳蛋白（蛋白糖化）；
6.凝块会凝结：由于大量的酸产生，牛奶和鸡蛋会凝结。
7.产气：乳糖分解产生酸和气体，强烈的发酵会破坏血凝块。
如果没有脱脂奶粉，则将新鲜的牛奶放在冰箱中过夜，去除奶油层，在流动的蒸汽中加热和消毒脱脂奶1小时，冷却至10摄氏度以下，用无菌纱布过滤，然后添加石蕊溶液直至熏衣草，分开试管并与以前一样消毒。
石蕊既是pH指示剂又是氧化还原指示剂。在酸性溶液（pH 4.5）中为红色，在碱性溶液（pH 8.3）中为蓝色。介质的自然色应为紫蓝色（pH 6.8）。石蕊可以被某些细菌还原为无色基质。
牛奶含有乳糖和三种主要蛋白质，即酪蛋白，牛奶蛋白质和乳球蛋白。
牛奶凝结主要是由含有凝乳酶的细菌引起的，凝乳酶可将酪蛋白转化为酪蛋白，或由于乳糖发酵产生大量酸而导致酪蛋白沉淀。
一些细菌产生脂肪酶，脂肪酶可以分解牛奶中的脂肪，形成黄色透明液体。
一些细菌具有酪蛋白水解酶，可以催化酪蛋白水解，最终将其转化为透明的液体酪蛋白沉淀。此过程称为肽化。
二、细菌生化检验实验试剂
| 序号 | 产品 | 货号 | CAS号 | 备注 |
| 1 | 脱脂奶粉 | HC1218 | ||
| 2 | 石蕊 | HXH502289 | 1393-92-6 | |
| 3 | 水1000.0 mL | |||
| 4 | 乙醇 | JT26000 | 64-17-5 |
脱脂奶粉100.0克，石蕊属，水1000.0 mL
三、细菌生化检验实验步骤
将奶粉完全溶解在水中，调节至pH 6.8，添加石蕊溶液，直到其呈现紫蓝色（pH 6.8），分成试管，每管约5 mL。在115°C下灭菌10分钟，迅速冷却，然后放入冰箱中以备后用。
石蕊溶液的制备方法：称取2.5 g石蕊，在碗中研磨，转移到装有40％乙醇水溶液的50 mL烧瓶中，煮沸1分钟，静置约10分钟，吸取上清液并将其转移到另一个在烧瓶中，向原始烧瓶中加入50 mL 40％的乙醇水溶液，煮沸1分钟。
将上清液添加到之前的上清液中，将两种上清液均匀混合，离心沉淀，将上清液倒入100 mL量筒中，用40％乙醇补足100 mL，并逐滴加入1 M盐酸直至溶液呈紫色，这是2.5％的石蕊溶液。
95％乙醇42.1 mL加水至100 mL是40％乙醇溶液。
3.测试方法
接种受试细菌的18-24小时培养物。如果是厌氧菌，则在培养基试管中加入无菌铁屑或指甲，并盖上无菌凡士林，然后在36±1℃下培养。 -14天。
四、细菌生化检验实验结果的判断
1.粉红色：将乳糖发酵产生酸；
2.紫色蓝色：乳糖经过发酵并保持其原始颜色；
3.蓝色：碱性反应，乳糖发酵，细菌分解培养基中的含氮物质产生碱性物质；
4.白色：石蕊恢复了；
5.澄清：消化乳蛋白（蛋白糖化）；
6.凝块会凝结：由于大量的酸产生，牛奶和鸡蛋会凝结。
7.产气：乳糖分解产生酸和气体，强烈的发酵会破坏血凝块。
如果没有脱脂奶粉，则将新鲜的牛奶放在冰箱中过夜，去除奶油层，在流动的蒸汽中加热和消毒脱脂奶1小时，冷却至10摄氏度以下，用无菌纱布过滤，然后添加石蕊溶液直至熏衣草，分开试管并与以前一样消毒。
