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免疫共沉淀技术实践（实验介绍,实验步骤,实验所需试剂）
Release Time：2020-07-24一，免疫共沉淀技术实验简单介绍
免疫沉淀技术是一种基于抗体和抗原之间特异性相互作用研究蛋白质相互作用的经典方法，该方法是确定完整细胞中两种蛋白质生理相互作用比较有效的方法。
当细胞在非变性条件下裂解时，完整细胞中的许多蛋白质-蛋白质相互作用后就会得以保留。当将蛋白A与固定在琼脂糖珠上的蛋白A抗体免疫沉淀时，结合到体内蛋白A的蛋白B也可以一起沉淀。然后通过蛋白质变性和分离，检测B蛋白以证明两者之间的相互作用。
二，免疫共沉淀实验所需的试剂
十二烷基硫酸钠; PMSF; RIPA裂解液；琼脂糖；PBS
三，免疫共沉淀技术实验的操作流程
（1）提取培养的细胞后，再加入适量的细胞裂解缓冲液（需含蛋白酶抑制剂），在冰上裂解约30分钟，在4°C条件下以最大速度离心细胞裂解液30分钟，然后取清液;
（2）取少量裂解液用于蛋白质印迹分析，再向剩余的裂解液中加入1μg相应的抗体到细胞裂解液中，在4°C条件下缓慢振荡孵育过夜；
（3）取10μl蛋白A琼脂糖珠，用适量的裂解缓冲液洗涤3次，每次3000转离心3分钟；
（4）将预处理过的10μl蛋白A琼脂糖珠加入已与抗体孵育过夜的细胞裂解物中，并在4°C缓慢振摇下孵育2-4小时，以使抗体和蛋白A琼脂糖珠偶联。
（5）免疫沉淀反应后，于4℃以3000转离心3分钟，再将琼脂糖珠离心至管底；小心吸出上清液，将琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗涤3-4次；最后，加入15μl2×SDS上样缓冲液，煮沸5分钟。
（6）SDS-PAGE，蛋白质印迹或质谱分析，免疫沉淀法测定结合蛋白
四，免疫共沉淀实验注意的细节
必须确保共沉淀蛋白质是通过添加的抗体获得，而不是外来的非特异性蛋白质沉淀出现的，单克隆抗体的使用有助于避免实验污染；
五，免疫共沉淀实验所需试剂清单
| 序号 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | PBS缓冲液 | HC2031 | ||
| 2 | RIPA裂解液 | HC1242 | ||
| 3 | 琼脂糖 | SF0012 | 9012-36-6 | |
| 4 | 十二烷基硫酸钠（SDS） | SS0013 | 151-21-3 | |
| 5 | 苯甲基磺酰氟（PMSF） | JY0002 | 329-98-6 |
