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大肠杆菌检测方法
Release Time：2020-07-14一、大肠菌检测实验介绍:
大肠菌属细菌是一组革兰氏阴性非细菌细菌，可以发酵乳糖，产生酸和气体，需氧和兼性厌氧菌。该细菌主要来源于人和动物的粪便，因此可将其用作粪便污染的指标，以评估食品卫生质量，推断出食物中肠道致病菌受到污染的可能性。食物中大肠菌的数量表示为100毫升（g）样品中最可能的大肠菌（MPN）数量。
二、实验所需仪器及试剂：
| 序号 | 产品 | CAS号 | 货号 | 备注 |
| 1 | 90*15mm培养皿 | FM-90-X | ||
| 2 | 三聚氰胺琼脂 | 108-78-1 | JQ2301 | |
| 3 | 标准革兰氏染色液 | HC0448 | ||
| 4 | 结晶紫染色液 | 548-62-9 | SX0037 | |
| 5 | 95％乙醇 | 64-17-5 | JT26000 | |
| 6 | 1％草酸铵水溶液 | 6009-70-7 | JT12066 | |
| 7 | 碘 | 7553-56-2 | JH0093 | |
| 8 | 碘化钾 | 7681-11-0 | JT0900 | |
| 9 | 皂苷 | 7518-22-1 | YZM013539 |
2.2 1000ml锥形瓶，1ml，10ml移液器。
2.3接种针。
2.4显微镜。
2.5超干净的工作台。
2.6幻灯片，酒精灯，洗耳灯泡，试管架。
2.7余额：0.01克。
2.8消毒锅。
2.9将培养皿（直径90mm）和试管在121°C灭菌30分钟。
2.10试管夹，酒精灯，秒表，载玻片3。培养基和试剂：
3.1乳糖胆盐发酵管：按照制造商的说明进行准备和消毒。
3.2曙红三聚氰胺琼脂平板：根据制造商的说明进行准备和灭菌。
3.3乳糖发酵管：按照制造商的说明进行准备和消毒。
3.4革兰氏染色液。
3.4.1结晶紫染色液：
水晶紫1g
95％乙醇20ml
1％草酸铵水溶液80ml
三、实验步骤
将结晶紫溶解在乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
3.4.2克氏碘溶液：碘1g、碘化钾2g、蒸馏水300ml
首先将碘和碘化钾混合，加入少许蒸馏水，摇匀，完全溶解后，加入蒸馏水至300毫升。
3.4.3沙皇复染溶液：沙黄色0.25g、95％乙醇10ml、蒸馏水90ml、将皂苷溶于乙醇、然后用蒸馏水稀释。
3.5生理盐水。
四、检验程序：
样品检验
稀释
↓
乳糖胆盐发酵管，36±1℃，24±2hr
↓ 不产生气体
↓大肠杆菌阴性琼脂平板，36±1℃，24±2hr
报告
革兰氏染色乳糖发酵管，36±1℃，24±2hr
G + G-，无芽孢杆菌，无产气，无产气
阴性大肠菌群大肠菌群阴性大肠菌阳性报告
五、大肠杆菌检测方法：
5.1 样品检验稀释：
5.1.1 以无菌操作将样品检验25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水的灭菌塑料烧杯中，经充分振摇成1：10均匀稀释液。
5.1.2用1ml无菌移液器吸取1ml 1:10稀释液，将其注入装有9ml无菌盐水的试管中，并摇匀至1：100稀释液。
5.1.3重复5.1.2的操作以进行1：1000稀释。
5.2乳糖胆盐发酵试验：根据食品卫生标准要求或对样品检验污染情况的估计，选择二个稀释度，每一稀释度接种3管，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管。 1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。然后置于36±1 ℃培养，在培养箱中放置24±2小时，如果所有乳糖胆盐发酵管均未产生气体，则可报告为大肠菌组否定；如果您有汽油，可以按照以下步骤操作。
5.3分离和培养：将产气发酵管接种在曙红蓝琼脂平板上，置于36±1°C的培养箱中，培养24小时后取出，观察菌落形态，进行革兰氏染色。
5.4确认试验：在上述平板上，挑取1或2个可疑大肠菌群进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，将其置于36±1℃的培养箱中24±2hr，观察气体。生产。乳糖发酵管产生的气体和革兰氏阴性阴性芽孢杆菌可被报告为大肠菌阳性。
5.5报告：根据确诊为大肠菌群阳性的试管数量，检查MPN搜索表并报告每100毫升（g）最有可能的大肠菌群数量。
