---

1.RNA琼脂糖凝胶电泳实验的实验目的
     通过该实验知识的分享和学习，使大家掌握植物总RNA非变性胶电泳的基本原理和实验方法。

---

2.RNA琼脂糖凝胶电泳实验原理
      RNA电泳实验可以在变性以及非变性两种条件下进行。非变性电泳实验一般使用的1.0%--1.4%的凝胶，使不同的RNA条带也能分开，但通过该实验是无法判断其分子量。只有在RNA完全变性的条件下时，RNA的泳动率才会与分子量对数呈线性的关系。如果要测定RNA分子量时，必须要用变性凝胶。当然需要快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通1%琼脂糖凝胶即可满足实验要求。

---

3.RNA琼脂糖凝胶电泳实验所需的材料、器具、试剂
        蘑菇的总RNA溶液。 电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。 琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，0.5μg/ml溴化乙锭（EB）10X载样缓冲液。

---

4.RNA琼脂糖凝胶电泳实验实验步骤

• 用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。
• 在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。在实验台上再加入5μl 1×TAE电泳缓冲液及1μl 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。
• 打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。

---

5. 对RNA的变性琼脂糖凝胶进行检测：
实验所需试剂：
a.MOPS缓冲液（10x）:0.4mol/L;吗啉代丙烷磺酸（MOPS） (Ph7.0);0.1mol/L NaAc;10mol/L EDTA;
b.上样需要的染料：50%甘油；1mol/L EDTA；0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝;
c.甲醛;
d.去离子甲酰胺，电泳槽清洗过程：去污剂洗干净（一般长时间浸泡过夜）—水冲洗—乙醇干燥—3%H2O2灌满——室温放置10分钟—0.1%DEPC水冲洗。

---

6. 实验操作步骤：
（1） 将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。
（2） 配制琼脂糖凝胶。
①称取0.5g琼脂糖，置干净的100ml 锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。
②待胶凉至60--70 ℃，依次向其中加入9ml 甲醛、5ml 10X MOPS缓冲液和0.5ul 溴化乙锭，混合均匀。
③灌制琼脂糖凝胶。
（3） 样品准备：
① 取 DEPC处理过的500ul小离心管，依次加入如下试剂： 10x MOPS缓冲液2ul，甲醛3.5ul,甲酰胺（去离子）10ul，RNA 样品 4.5ul,混匀。
② 将离心管置于60℃水浴中保10分钟，再置冰上2分钟。
③ 向管中加入3ul 上样染料，混匀。
（4）上样。
（5）电泳：电泳槽内加入1XMOPS缓冲液，于7.5V/ml 的电压下电泳。
（6）电泳结束后，在紫外灯下检查结果。

---

序号	产品名	货号	PH值
1	10ul无菌滤芯吸头	FT-10X-H	FT-10X-H 10ul滤芯白吸头（灭菌）,灭菌耗材
2	10ul滤芯吸头	FT-10X	FT-10X 10ul滤芯白吸头,非灭菌耗材
3	10ul无菌吸头	FT-10-H	FT-10-H 10ul白吸头(灭菌),灭菌耗材
4	10ul普通吸头	FT-10	FT-10 10ul白吸头,非灭菌耗材
5	20ul白吸头	FT-200	FT-200 20ul白吸头,非灭菌耗材
6	MOPS缓冲液	HC1427	HC1427 MOPS电泳缓冲液,10×,RNase free
7	DEPC处理水	HC1335	HC1335 DEPC处理水,0.001
8	二甲胺	JH0376	JH0376 二甲胺,AR,40 wt. % in H2O
9	去离子甲酰胺	HXH504144	HXH504144 甲酰胺,>98.5%(GC)
10	溴化乙锭溶液	SS2144	SS2144 溴化乙锭(EB),for fluorescence，~1% in H2O
11	溴酚蓝	SX0029	SX0029 溴酚蓝, AR
12	二甲苯蓝	SX0100	SX0100 二甲苯蓝FF,80%
13	琼脂糖	SF0013	SF0013 琼脂糖,HyAgarose， 3:1琼脂糖
14	琼脂糖	SF0014	SF0014 琼脂糖,HyAgarose，PCR级高分辨率琼脂糖
15	琼脂糖	SF0012	SF0012 琼脂糖,HyAgarose，低电渗low EEO（常用）
16	琼脂糖	SF0012	SF0012 琼脂糖,HyAgarose，低电渗low EEO（常用，特价）
17	琼脂糖	SF0005	SF0005 琼脂糖,HyAgarose，低熔点琼脂糖适用于分离小的核酸片段
18	3-吗啉丙磺酸(MOPS)	SS1367	SS1367 3-吗啉丙磺酸(MOPS),≥99.0%

---