乙二醛化RNA的琼脂糖凝胶电泳
Release Time:2022-10-13RNA的制备:
1. 应该确保RNA在无盐状态下:用70% 冰凉的 乙醇(EtOH) 清洗至少两次。如果你仍然可以观察到一个相当大的盐颗粒,然后用冰凉70%EtOH重新沉淀清洗。
2. 在室温下风干颗粒至少30分钟。
3. 在3.7 ml H2O(最多20 mg)中重新悬浮RNA颗粒。
然后添加:
※ 2.7 ml 6 M乙二醛
※ 8.0毫升二甲基亚砜
※ 1.6毫升0.1M NaH2PO4(乙二醛应在任何类型的离子交换树脂上去离子,如BIOFOUNT 提供的树脂。将等分样品储存在-20℃的密封管中。)
4. 在50℃条件下培养1小时。
5. 加入5g 50%甘油、0.01%溴酚蓝、0.01%二甲苯氰醇FF溶液。
凝胶的制备:
1. pH 6.8条件下,在10mM NaH2PO4溶液中准备1.4%的琼脂糖凝胶。溶解琼脂糖后,允许冷却至70℃,然后添加 SDS 至0.1%最终浓度;
2. 凝胶在125V 条件下运行3小时。凝胶运行期间,缓冲液必须循环。
RNA可视化:
1. 将凝胶浸泡在50mM NaOH溶液中,轻轻摇晃大约20分钟。
2. 将凝胶浸泡在 TBE 或TAE+1 ug/ml EtBr 溶液中,轻轻摇晃大约20分钟。
3. 在紫外灯条件下拍照。