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溴化乙锭使用注意事项
溴化乙锭是检测 DNA/RNA 最常用的染料。溴化乙锭也是一种 DNA 螯合剂，可将自身插入双螺旋碱基对之间的空间中。溴化乙锭在 300 和 360 nm 处具有最大紫外吸光度。此外，它还可以从 260 nm 辐射条件下吸收激发核苷酸中的能量。溴化乙锭在水溶液中的荧光明显低于螯合染料。  溴化乙锭是一种敏感、易染色的 DNA。溴化乙锭的主要缺点是它是一种有效的诱变剂。实验方案中必须极其谨慎地处理，并在处置前进行净化。尽管如此，溴化乙锭染色的敏感性、简单性（如果需要，染料可以在凝胶中与 DNA 一起运行，消除了单独的染色/脱色过程）和非破坏性特性，使其成为双链 DNA 的标准染色剂。  重要的是要注意，天然 DNA 的双链结构强烈增强了溴化乙锭的染色。变性、ssDNA 或 RNA 的染色相对不敏感，需要大约 10 倍的核酸才能进行等效检测。
另一个限制是溴化乙锭的荧光被聚丙烯酰胺淬灭，在 PAGE 凝胶中灵敏度降低了 10-20 倍。

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方法1-使用溴化乙锭检测 DNA/RNA
※ 注意：溴化乙锭是一种强诱变剂，只有穿戴好手套和在做好适当的预防措施条件下操作。
方法I - 在凝胶和缓冲液中加入溴化乙锭
1. 凝胶制备
※ 根据制备琼脂糖凝胶的标准方案将琼脂糖溶解在缓冲液中。
※ 让凝胶冷却至 60-70°C。
※ 添加 EtBr 至 0.5 µg/ml 最终浓度。 （原液一般为 10 mg/ml，需要 5μl 原液/100ml 凝胶）。
※ 倒入凝胶并照常放置。
2. 缓冲液准备
※ 准备足够的缓冲液（TBE 或 TAE）来填充设备。
※ 添加 5µl/100ml EtBr 原液。
3. 跑胶
运行凝胶
※ 跑完胶后，将凝胶置于 UV 灯箱上的保鲜膜中。在微弱的橙色背景上，条带将显示为亮橙色。
※ 这种方法将检测大约 5ng 的 DNA。 可能需要在水中或 1 mM MgSO4 中脱色以达到完全灵敏度。
※ 作为替代方案，溴化乙锭可以包含在凝胶中，但不包含在缓冲液中。 溴化乙锭带正电荷，会从 DNA 向相反的方向迁移。 通常，即使在凝胶的阴极端，仍有足够的溴化乙锭与 DNA 结合，其中溴化乙锭尚未迁移出凝胶。 然而，它们足以满足多种用途，并且不会产生太多的溴化乙锭废弃物。

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方法2-Post-Run Staining
※ 在水或缓冲液中准备足够的 0.5µg/ml EtBr 以完全浸没凝胶。该溶液在室温下避光保存 1-2 个月。
※ 运行后将凝胶浸入染色溶液中 15-30 分钟（取决于凝胶厚度）。
※ 将凝胶放在 UV 灯箱上的保鲜膜上，并在 300nm 照明下观察。条带将在淡橙色背景上显示为亮橙色。
备注：
1. 该方法最大限度地减少了每次凝胶运行产生的溴化乙锭废物量。
2. 灵敏度与方法 I 相同，可能需要在水中或 1mM MgSO4 中脱色以达到最佳灵敏度。
3. 在改实验方法中，随着染料扩散到基质中，从凝胶的顶部和底部可以看到条带。 通过浸泡凝胶直到条带的顶部和底部出现，然后将凝胶从染色溶液中取出 15-30 分钟，通常可以在不脱色的情况下获得高对比度结果。 在此期间，染色剂将继续扩散到凝胶中，以牺牲游离染料为代价与 DNA 结合。 结果是没有脱色，背景较低。

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