蛋白交联(优质交联剂和标记试剂)
Release Time:2022-09-13交联剂的应用
交联是通过共价键化学连接两个或多个分子的过程。 该技术在与蛋白质和其他生物分子一起使用时通常称为生物偶联,是许多蛋白质组学方法的重要组成部分,包括为蛋白质印迹和 ELISA 创建可检测探针以及研究蛋白质结构和相互作用的策略
常用蛋白交联试剂:
产品 | 货号 | |
Sulfo-SMCC | YZM000951 | |
DSS(双琥珀酰亚胺辛二酸酯) | ||
DSP(二硫双(琥珀酰亚胺丙酸酯)),Lomant 试剂 |
交联剂概念
交联剂(或交联剂)是含有两个或多个反应末端的分子,它们能够或化学连接到蛋白质或其他分子上的特定官能团(伯胺、巯基等)。 本文介绍了现有的交联剂的化学性质和种类。
交联剂结构和化学概述
蛋白质官能团
尽管蛋白质结构复杂,包括 20 种不同氨基酸的组成和序列,但只有少数蛋白质官能团构成实际生物偶联方法的可选靶标。事实上,只有四种蛋白质化学靶标占了绝大多数交联和化学修饰技术:
※ 伯胺 (–NH2):该基团存在于每条多肽链的 N 末端(称为 α-胺)和赖氨酸 (Lys, K) 残基的侧链(称为ε-胺)。由于其在生理条件下的正电荷,伯胺通常是蛋白质的外向(即在外表面上);因此,它们通常可以在不使蛋白质结构变性的情况下进行偶联。
※ 羧基 (-COOH):该基团存在于每条多肽链的 C 末端以及天冬氨酸 (Asp, D) 和谷氨酸 (Glu, E) 的侧链中。与伯胺一样,羧基通常位于蛋白质结构的表面。
※ 巯基 (-SH):该基团存在于半胱氨酸 (Cys, C) 的侧链中。通常,作为蛋白质二级或三级结构的一部分,半胱氨酸通过二硫键 (-S-S-) 在其侧链之间连接在一起。这些必须还原为巯基,以使它们可用于大多数类型的反应基团的交联。
※ 羰基 (-CHO):通过用偏高碘酸钠氧化多糖翻译后修饰(糖基化),可以在糖蛋白中产生酮基或醛基。
此图描述了免疫球蛋白 (IgG) 蛋白的一般结构。 重链和轻链通过非共价相互作用和共价链间二硫键结合在一起,形成双边对称结构。 H 链和 L 链的 V 区包含免疫球蛋白 (Ig) 分子的抗原结合位点。 每个 Ig 单体含有两个抗原结合位点,据说是二价的。 铰链区是第一个和第二个 C 区结构域之间的 H 链区域,并通过二硫键连接在一起。 这种灵活的铰链(存在于 IgG、IgA 和 IgD 中,但不存在于 IgM 或 IgE 中)区域允许两个抗原结合位点之间的距离发生变化。 还显示了几个官能团,它们是实际生物偶联的可选择目标。
对于这些蛋白质官能团目标中的每一个,都存在一种到几种类型的能够靶向它们的反应基团,这些反应基团已被用作合成交联和修饰试剂的基础。